| Quantification of Neisseria meningitidis Adherence to Human Epithelial Cells by Colony Counting
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] To cause an infection, the human specific pathogen Neisseria meningitides must first colonize the nasopharynx. Upon tight interaction with the mucosal epithelium, N. meningitidis may cross the epithelial cellular barrier, reach the bloodstream and cause sepsis and/or meningitis. Since N. meningitidis niche is restricted to humans the availability of relevant animal models to study host-pathogen interactions are limiting. Therefore, most findings that involve N. meningitidis colonization derive from studies using cultured human cell lines. Human epithelial cells have been successfully used to examine and identify molecular effectors involved in initial adherence of the pathogen. Here, we describe a standard protocol to quantify the adherence of N. ...
[摘要] 为了引起感染，人类特定的病原体脑膜炎奈瑟氏脑必须首先在鼻咽中定居。 与粘膜上皮紧密相互作用时， 脑膜炎双球菌可能穿过上皮细胞屏障，到达血流并引起败血症和/或脑膜炎。 由于 N meningitidis niche限于人类。 因此，大多数涉及N 脑膜炎菌群定植来源于使用培养的人类细胞系的研究。 在最初的病原体坚持。 在这里，我们描述了一个标准协议来量化N的遵守情况。 脑膜炎双球菌对上皮细胞FaDu细胞的作用。 感染后收集的细胞裂解物的集落计数用于量化对上皮细胞的粘附。
【背景】作为细菌发病机制的重要一步。细菌粘附素与宿主细胞表面受体之间的分子相互作用决定了定植位点（Soto and Hultgren，1999）。鼻咽中的上皮层形成人类限制性病原体N的第一个细胞屏障。 meningitidis 遇到和无症状殖民。牢固粘附，并与宿主细胞相互作用可导致上皮细胞和进入血液的渗透，在危及生命的败血症和/或脑膜炎（斯蒂芬斯，2009）得到的。从细菌膜延伸出来的长细丝（称为IV型菌毛（Tfp））与PilC1尖端定位的粘附素在初始依从性中起关键作用。脑膜炎到鼻咽上皮细胞（Marceau等，1995; Rudel等，1995）。 Tfp不仅促进与宿主细胞的相互作用，而且参与细菌聚集体的发育，这可以有助于高水平的粘附和抵抗剪切应力（Helaine等，2005，Mikaty ...
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| Isolation and Infection of Drosophila Primary Hemocytes
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] Phagocytosis of invading pathogens and their subsequent clearance in lysosomes is important for organismal fitness. We have devised the following protocol to extract phagocytic hemocytes from wild-type and mutant Drosophila larvae and infect the isolated hemocytes with GFP-labeled E. coli to measure the rate of phagocytosis and degradation within individual hemocytes over time.
[摘要] 入侵病原体的吞噬作用及其随后在溶酶体中的清除对于有机体适应性是重要的。我们设计了以下方案从野生型和突变型果蝇幼虫中提取吞噬性血细胞，并用GFP标记的E感染分离的血细胞。大肠杆菌以测量个体血细胞内吞噬和降解的速度。
背景 下面描述的实验可用于研究吞噬体的生物发生，成熟和向溶酶体的递送。细菌积累已经在免疫受损的果蝇的背景下得到充分的研究，其具有IMD或Toll信号传导中的缺陷，并导致抗微生物肽的表达降低（例如，Lemaitre和Hoffmann ，2007; Kleino和Silverman，2014）。细菌感染的细胞响应在果蝇中的研究较少，大多数研究集中于干扰血细胞对细菌的最初吞噬吞噬的突变（Kocks等人，2005年） ;帕森斯和福利，2016）。这种细菌摄取是直接使用FACS分析进行测量（Tirouvanziam等人，2004）。然而，对于吞噬体成熟的详细分析，我们发现检查附着在玻璃盖板上的个体血细胞是有利的（Akbar等人，2011; Rahman等人。 ，2012; Akbar等人，2016），因为这个过程为我们研究吞噬体成熟提供了时间和空间分辨率的最佳组合。
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| Mouse BMDC-dependent T Cell Polarization Assays
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Author:
Date:
2016-02-05
[Abstract] In response to exposure to antigen, T cells whose T cell receptor (TCR) are capable of recognizing the self MHC-antigen derived peptide complex, respond to the antigen and differentiate into one of several subsets, namely TH1, TH2, TH17, Treg, etc. characterized by the signature cytokine they secrete, namely IFN-γ, IL-4, IL-17 or IL-10, respectively, referred to as syngeneic polarization as the MHC presenting the foreign antigen/epitope is self-derived.
T cell responses following incubation for defined periods, usually 3 days for mouse splenocytes, are routinely measured by assessing the antigen-stimulated proliferation of T cells by measuring the radiolabeled precursor thymidine incorporated into the genomic DNA of the dividing T cell; the direction of polarization ...
[摘要] 响应于暴露于抗原，其T细胞受体（TCR）能够识别自身MHC抗原衍生的肽复合物的T细胞应答抗原，并分化为几个亚类之一，即TH1，TH2，TH17，Treg， 等。其特征在于它们分泌的特征性细胞因子，即IFN-γ，IL-4，IL-17或IL-10，分别称为同基因极化，因为呈递外源抗原/表位的MHC是自身衍生的。通常通过测量掺入分裂T细胞的基因组DNA中的放射性标记的前体胸腺嘧啶，通过评估抗原刺激的T细胞增殖来常规测量对于确定的时间段（通常为小鼠脾细胞3天）孵育后的T细胞应答;通过使用培养上清液的ELISA或通过细胞内细胞因子染色随后通过流式细胞术测量由增殖或非增殖应答性T细胞产生的细胞因子来评估极化方向。在下面详述的方案中，我们描述使用的同源小鼠骨髓源性树突状细胞（BMDC）作为APC刺激脾源性T细胞。通过将放射性标记的前体胸苷掺入基因组DNA中来测量T细胞的增殖反应，并通过在72小时期间测量它们分泌的细胞因子即IFN-γ，IL-4和IL-17来评估其极化方向使用ELISA。此外，我们在细胞内细胞因子染色后使用流式细胞术检测CD3 + /CD4 + /CD25低人群中的IL-17阳性T细胞。使用牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis） - Bacille Calmette ...
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