| Ex vivo Assessment of Mitochondrial Function in Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using XF Analyzer
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Author:
Date:
2021-04-05
[Abstract] Cellular health and function, as we know today, depend on a large extent on mitochondrial function. The essential function of mitochondria is the energy production, more precisely ATP production, via oxidative phosphorylation. Mitochondrial energy production parameters therefore represent important biomarkers. Studies on human cells have mainly been performed on in vitro cell cultures. However, peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are particularly suitable for such examinations. That’s why this protocol describes a method to measure key parameters of mitochondrial function in freshly isolated PBMCs with the latest technology, the XF Analyzer. For this ex vivo approach PBMCs are first isolated out of human anticoagulated blood. Next, they are attached to the surface of special ...
[摘要] [摘要]正如我们今天所知，细胞的健康和功能在很大程度上取决于线粒体的功能。线粒体的基本功能是ENER GY生产，更精确的LY ATP生产，通过氧化磷酸化。因此，线粒体能量产生参数代表重要的生物标记。对人类细胞的研究主要是在体外细胞培养中进行的。然而，外周血单核细胞（PBMC）是特别升ý适于这样的检查。这就是为什么这个协议描述测量与最新的技术，新鲜分离的PBMC线粒体功能的关键参数的方法的XF分析。对于这个离体PBMC首先是从人抗凝血液中分离出来的。接下来，将它们附着到预先涂有Poly-D-Lysine的特殊微孔板的表面上。期间的氧消耗速率（OCR）以及细胞外酸化率（ECAR）的应力试剂寡，羰氰化物随后的测量4 - （三氟甲氧基）苯腙（FCCP），鱼藤酮和抗霉素A被注入。可以从获得的结果中计算出几个线粒体参数。该协议的应用允许分析对人体细胞的各种影响，例如药物或环境因素。
[背景]线粒体在维持正常细胞功能中起关键作用。现在众所周知，它们不仅通过氧化磷酸化产生ATP，而且还参与氨基酸，脂质和核苷酸的代谢，潜水信号转导和氧化还原过程以及质量控制和降解过程，包括线粒体和磷酸化。细胞凋亡（Pfanner等，2019）。然而，线粒体代表正常细胞中ATP合成的主要位点（Akbari等人，2019）。为此，通过多亚基酶复合物I – ...
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| Induction of Epithelial-mesenchymal Transition in MDCK II Cells
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is a reversible process of epithelial cell transdifferentiation into a mesenchymal cell, that enables initiation of cell migration. EMT plays an important role in embryonic development, tissue repair and cancer metastasis. Better understanding of cellular and molecular events during EMT will not only provide novel insights on how mammalian organism develops and how epithelial tissues regenerate, but also can identify novel therapeutic targets for cancer therapy. Here we aim to provide a detailed protocol on how to induce EMT in Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) II epithelial cell line and perform immunofluorescent staining on EMT-induced cells.
[摘要] [摘要]上皮-间质转化（EMT）是上皮细胞向分化为间充质细胞的可逆过程，能够启动细胞迁移。EMT在胚胎发育，组织修复和癌症转移中起着重要作用。更好地了解EMT过程中的细胞和分子事件，不仅将为哺乳动物生物的发育以及上皮组织的再生提供新颖的见解，而且还可为癌症治疗确定新的治疗靶标。在这里，我们旨在提供有关如何在Madin-Darby犬肾脏（MDCK）II上皮细胞系中诱导EMT并在EMT诱导的细胞上进行免疫荧光染色的详细协议。
[背景]上皮细胞的特征在于细胞可塑性，即具有采用不同细胞表型的能力（Carter等，2019； Yuan等，2019）。上皮-间质转化（EMT）是上皮细胞可塑性的一种形式。在EMT期间，上皮细胞会破坏细胞间连接，使其极性失去作用，并从鳞状，长方体或柱状变为梭形并迁移，从而获得间充质细胞的特性（Kalluri和Weinberg，2009）。EMT可以通过免疫染色和测量标志物（例如E-钙粘蛋白，ZO-1，波形蛋白，纤连蛋白和N-钙粘蛋白）的表达水平进行评估（Kalluri和Weinberg，2009）。在过去十年中在EMT研究中心大多的转录因子的作用例如，SNAIL1 / 2，ZEB1 / ...
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| Isolation of Extracellular Vesicles Derived from Mesenchymal Stromal Cells by Ultracentrifugation
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Date:
2020-12-20
[Abstract] Extracellular vesicles (EVs) are a heterogeneous group of membranous vesicles that differ on their biogenesis and release pathways, such as exosomes, microvesicles and apoptotic bodies. They are involved in cell-to-cell communication delivering signal molecules (proteins, nucleic acids, lipids, etc.) that can regulate different physiological processes, as well as the development and progression of several diseases. There are different methods and commercial kits to isolate EVs and depending on the methodology one could obtain EVs with different degrees of efficiency, purity and it can be more or less time-consuming. Then, the choice has to be according to the different advantages and disadvantages, and their use for downstream applications. Here, we describe the EVs isolation ...
[摘要] [摘要]细胞外囊泡（EV多个），关于它们的生物合成和释放途径不同膜囊泡的一组异质小号，诸如外来体，微泡和凋亡小体。它们参与细胞间传递信号的信号分子（蛋白质，核酸，脂质等），这些信号分子可调节不同的生理过程以及几种疾病的发生和发展。分离电动汽车有不同的方法和商业工具包，根据方法学的不同，人们可以获得具有不同程度的效率，纯度的电动汽车，这或多或少会耗时。然后，必须根据不同的优缺点及其在下游应用中的用途进行选择。在这里，我们描述了通过超速离心从间充质基质细胞分离电动汽车的方法。可以使用通用培养基和缓冲液进行电动汽车隔离，并且仅需要分析型超速离心机即可。此外，该方法可用于获得电动车的大量再现性良好发展体外和体内实验，研究它们的生物学作用小号。
[背景]间充质干细胞（MSCs）对不同疾病的进展具有保护作用，有助于免疫调节和炎症状态（Bartholomew等，2002； Togel等，2005； Azmi等，2013； Ebrahimi等人，2013； Ben-Ami等人，2014）。它们的保护作用不仅归因于它们的转分化作用，还归因于它们的旁分泌机制，例如释放出具有免疫调节，抗炎，抗凋亡和促血管生成功能的细胞外小泡（EV）（Bruno等，2009； Camussi等）。 。，2010一个;农庄。等人，2020） ...
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