| Isolation and Separation of Epithelial CD34+ Cancer Stem Cells from Tgfbr2-deficient Squamous Cell Carcinoma
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Most epithelial tumors have been shown to contain cancer stem cells that are potentially the driving force in tumor progression and metastasis (Kreso and Dick, 2014; Nassar and Blanpain, 2016). To study these cells in depth, cell isolation strategies relying on cell surface markers or fluorescent reporters are essential, and the isolation strategies must preserve their viability. The ability to isolate different populations of cells from the bulk of the tumor will continue to deepen our understanding of the biology of cancer stem cells. Here, we report the strategy combining mechanical tumor dissociation, enzymatic treatment and flow cytometry to isolate a pure population of epithelial cancer stem cells from their native microenvironment. This technique can be useful to further ...
[摘要] 大多数上皮肿瘤已经显示含有可能是肿瘤进展和转移的驱动力的癌症干细胞（Kreso和Dick，2014; Nassar和Blanpain，2016）。 为了深入研究这些细胞，依赖于细胞表面标志物或荧光报告基因的细胞分离策略是必不可少的，分离策略必须保持其活力。 从大部分肿瘤中分离不同细胞群的能力将继续加深我们对癌症干细胞生物学的认识。 在这里，我们报告了结合机械肿瘤解离，酶处理和流式细胞术的策略，从其天然微环境中分离出纯种群的上皮癌干细胞。 该技术可用于进一步功能性地分析癌症干细胞（RNA测序和表观遗传学分析），在培养物中培养它们或在移植测定中直接使用它们。
【背景】肿瘤复发和转移是大多数与癌症有关的死亡的主要原因。恶性肿瘤可能由干细胞群体启动和维持（Nassar和Blanpain，2016; Bonnet和Dick，1997），这些细胞是预防复发的重要治疗靶点（Baumann et al。，2008）。研究表明，鳞状细胞癌由肿瘤干细胞亚群维持，其抗药性，并通过进行自我更新和分化（如正常干细胞）引发肿瘤复发，产生增殖祖细胞，其分化形成肿瘤大部分（Locke et al。，2005; Prince et al。，2007; Malanchi et al。，2008; de Sousa e Melo et ...
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| Isolation of Murine Alveolar Type II Epithelial Cells
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] We have optimized a protocol for isolation of alveolar type II epithelial cells from mouse lung. Lung cell suspensions are prepared by intratracheal instillation of dispase and agarose followed by mechanical disaggregation of the lungs. Alveolar type II epithelial cells are purified from these lung cell suspensions through magnetic-based negative selection using a Biotin-antibody, Streptavidin-MicroBeads system. The purified alveolar type II epithelial cells can be cultured and maintained on fibronectin-coated plates in DMEM with 10% FBS. This protocol enables specific investigation of alveolar type II epithelial cells at molecular and cellular levels and provides an important tool to investigate in vitro the mechanisms underlying lung pathogenesis.
[摘要] 我们优化了从小鼠肺分离肺泡II型上皮细胞的方案。通过气管内滴注分泌酶和琼脂糖，然后机械解聚肺来制备肺细胞悬浮液。通过使用生物素抗体Streptavidin-MicroBeads系统的磁性阴性选择，从这些肺细胞悬液中纯化肺泡II型上皮细胞。可以将纯化的肺泡II型上皮细胞培养并维持在含有10％FBS的DMEM中的纤连蛋白包被的平板上。该方案能够在分子和细胞水平上对肺泡II型上皮细胞进行特异性研究，并提供了一种重要的工具，用于在体外研究肺发病机制的机制。
背景 肺泡II型上皮细胞在肺泡完整性维持，表面活性蛋白合成和分泌中起关键作用，并防止细菌和病毒的肺部感染。最近使用小鼠肺癌模型的研究已经证明，肺泡II型上皮细胞是由化学致癌物质和致癌突变诱导的腺瘤/腺癌的关键细胞（Qu 等人，2015; Zhou > et al。，2015和2017）。为了进一步扩大我们对肺泡II型上皮细胞在体内肺发病机制中的作用的理解，需要分离肺泡II型上皮细胞以允许体外精确的机理分析， EM>。基于先前的研究（Corti等人，1996; Rice等人，2002），在我们的实验室中使用了一种修饰的方法来分离高度纯化的，可行的和可培养的来自小鼠的肺泡II型上皮细胞（Zhou等人，2015; Sun等人，2016）。
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| Isolation of Nippostrongylus brasiliensis Larvae from Mouse Lungs
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Author:
Date:
2016-02-20
[Abstract] The rodent parasite Nippostrongylus brasiliensis (N. brasiliensis) models the salient features of helminth infection including skin penetration, migration from tissues to lung, maturation and egg production in the gut. As a potent activator of systemic and mucosal Th2 immune responses, Nippostrongylus brasiliensis has been extensively used to study host protective immunity and in vivo regulation of Th2 immune response. Six to eight week old C57Bl/6J, Balb/c mice or any other strains are suitable, as all are susceptible to infection. Inocula of 150-650 L3 larvae can be administered by subcutaneous injection, but for greatest consistency a dose of 550 L3 larvae is routinely used for experimental purposes. We have optimized three different protocols for ...
[摘要] 啮齿动物寄生虫（Nippostrongylus brasiliensis）（<巴西> ）模拟蠕虫感染的显着特征，包括皮肤渗透，从组织到肺的迁移，肠道中的成熟和产蛋。作为全身性和粘膜Th2免疫应答的有效激活剂，巴西尼罗巴戟天已广泛用于研究宿主保护性免疫和体内调节Th2免疫应答。 6至8周龄的C57Bl/6J，Balb/c小鼠或任何其它菌株是合适的，因为所有这些菌株都易于感染。 150-650LL幼虫的接种可以通过皮下注射给药，但是为了最大的一致性，通常将550LL幼虫的剂量用于实验目的。我们已经优化了三种不同的方案用于从感染了巴西尼罗巴戟甲L3阶段的小鼠的肺部分离幼虫。幼虫可以从体内任何部位接种后18-60小时迁移到肺部。在接种后48小时，出现在肺峰中的幼虫的数目，并且建议在48小时进行分离/收获以获得每种收获方法的最大一致性：
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