| Determination of DNA Damage in the Retina Photoreceptors of Drosophila
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] The retina is sensitive for light damages, because of direct light exposure, especially intense blue and UV light, which increase level of ROS and other toxic phototransduction products in photoreceptor cells. In our previous work (Damulewicz et al., 2017a and 2017b), we used 8-oxo-deoxyguanosine (8-OHdG) as a marker for oxidative stress to investigate the role of heme oxygenase in DNA protection against UV light. In this protocol, we showed how to determine the level of DNA damages in the retina using immunohistochemical staining.
[摘要] 视网膜对光损伤敏感，因为直接光照，尤其是强烈的蓝光和紫外光，这增加了光感受器细胞中ROS和其它有毒光转导产物的水平。 在我们以前的工作（Damulewicz等人，2017a和2017b）中，我们使用8-氧代 - 脱氧鸟苷（8-OHdG）作为氧化应激的标记来研究血红素加氧酶在DNA保护中的作用 防紫外线。 在这个协议中，我们展示了如何使用免疫组织化学染色来确定视网膜中DNA损伤的水平。
【背景】脱氧核糖核酸（DNA）是所有生物体的必需分子。它含有遗传密码，其中含有对生物体结构和代谢所必需的蛋白质和其他分子的说明。 DNA由两条核苷酸链组成。每种核苷酸是四种类型的核苷碱基（胞嘧啶，鸟嘌呤，腺嘌呤和胸腺嘧啶），脱氧核糖和磷酸酯基团中的一种。 DNA结构中的物理和化学变化被归类为DNA损伤。它包括一个或两个DNA断裂链，缺少核碱基的核苷酸或化学变化。损坏可能是由于环境因素诱导，如化学物质或UV光暴露，或在代谢过程，其产生活性氧，活性氮物质，反应性羰基物质和烷化剂（德邦特和van Larebeke，2004）的结果。
其中最常见的DNA损伤是-8-氧代脱氧鸟苷（8-OHdG的），所有这些是由活性氧物种的DNA氧化的产物，它作为氧化应激（德索萨-Pinto的等的标记。 ，2001，Swenberg等人，2011; ...
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| Bacterial Porphyrin Extraction and Quantification by LC/MS/MS Analysis
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Author:
Date:
2015-10-05
[Abstract] Heme is an iron-containing porphyrin which acts as a prosthetic group in several enzymes involved in disparate functions, such as respiration and H2O2-scavenging. Escherichia coli is able to produce heme endogenously since it contains all the enzymes involved in the nine-step biosynthesis pathway, which in absence of stress and in iron-replete media proceeds unabated. However, we recently showed that two steps are affected by H2O2 stress (Mancini and Imlay, 2015). To compensate, two enzymes, namely the ferrochelatase (HemH) and an isozyme of coproporphyrinogen III oxidase (HemF), are activated by the H2O2-responsive regulator OxyR. Genetic mutations that block either adaptation cause the intracellular accumulation ...
[摘要] 血红素是含铁的卟啉，其在参与不同功能（例如呼吸和H 2 O 2 O 2 - 清除）的几种酶中充当辅基。大肠杆菌能够内源性产生血红素，因为其含有涉及九步生物合成途径的所有酶，其在没有应激的情况下和在铁补充培养基中不减弱地进行。然而，我们最近显示两个步骤受H 2 O 2 O 2胁迫的影响（Mancini和Imlay，2015）。为了补偿，两种酶，即铁螯合酶（HemH）和粪卟啉原III氧化酶（HemF）的同工酶被H 2 O 2反应性调节剂OxyR激活。阻断任一适应的遗传突变导致原卟啉IX和粪卟啉原III的细胞内积累，分别是HemH和HemF的底物。我们在这里描述一种方法，用于提取和量化原卟啉IX和粪卟啉III，coproporphyrinogen III的自发氧化的产物。
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