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Date:
2018-01-05
[Abstract] Plasmodesmata (PD) are nanometric (~20 nm wide) membrane lined pores encased in the cell walls of the adjacent plant cells. They allow the cells to exchange all types of molecules ranging from nutrients like sugar, hormones, to RNAs and various proteins. Unfortunately, they are also hijacked by phyto-viruses, enabling them to spread from cell-to-cell and then systematically throughout the whole plant. Their central position in plant biology makes it crucial to understand their physiology and especially link their function to their structure. Over the past 50 years, electron microscopists have observed them and attempted to ultrastructurally characterize them. They laid the foundation of what is known about these pores (Tilney et al., 1991; Ding et al., 1992; Oparka and ...
[摘要] Plasmodesmata（PD）是包裹在相邻植物细胞的细胞壁中的纳米（〜20nm宽）膜衬里的孔。它们允许细胞交换从糖，激素，RNA到各种蛋白质等营养物质的所有类型的分子。不幸的是，它们也被植物病毒劫持，使它们从细胞间传播，然后在整个植物体系中传播。它们在植物生物学中的核心地位使得理解其生理机制，尤其是将其功能与其结构联系起来至关重要。在过去的50年中，电子显微镜观察家们已经观察到了这些现象，并试图用超微结构来表征它们。他们为已知的这些毛孔奠定了基础（Tilney等人，1991; Ding等人，1992; Oparka和Roberts，2001; Nicolas等人， et al。，2017a）。
尽管三维电子显微镜（3D-EM）爆炸，PD超微结构仍然不支持这种技术。第一个技术难点是在尽可能接近原生状态的情况下处理它们。其次，由于染色/固定试剂穿透率差，其体积增大，含水量高以及存在酸性液泡，植物样品显示自己难以加工。最重要的是，它们在细胞壁上的独特位置和它们的纳米尺寸使得难以方便地染色以便看到这些孔隙的内部运作。
这里我们详细描述Nicolas et al。（2017b）中使用的协议，对PD进行细节化处理，并生成高分辨率的X线断层图。
【背景】高压冻结（HPF）依赖于样品中存在的水的玻璃化。通过以足够高的冷冻速度（10 ...
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