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Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] This protocol describes the generation of protoplasts from protonemal tissue of the moss Physcomitrium patens (syn. Physcomitrella patens), using Cellulase ONOZUKA R10 and Macerozyme R10, followed by polyethylene glycol (PEG) mediated transformation. The protonemal tissue grown in liquid suspension was harvested and treated with enzyme cocktails mix of 1.5% Cellulase ONOZUKA R10 and 0.5% Macerozyme R10 to generate 1,8 million protoplasts within 3 h.
[摘要] [摘要]该方案描述从苔藓原丝体的原生质体组织的生成Physcomitrium藓（同义词小立碗藓），使用纤维素酶Onozuka R 10和离析酶R10，随后聚乙二醇（PEG）介导的转化。收获在液体悬浮液中生长的原质组织，并用1.5％Cellulase ONOZUKA R10和0.5％Macerozyme R10的酶混合物混合处理，在3小时内产生180万原生质体。
[背景]由于其在自然同源性定向修复中的效率，Physcomitrium patens非常适合用作植物实验系统，尤其是用于基因的异源表达，从而可以产生具有可预测特性和特征的转化体。此外，P.patens具有低成本培养的优势，并且可以在生物反应器中大量维护（Reski等人，2018）。的基因工程展叶剑叶藓细胞允许大规模生产天然产物和药物如的毒胡萝卜素和其它萜类的候选药物，这是很难的访问（西蒙森等人，2009） 。该协议显示了如何分离和转化从单倍体原生质丝释放的彭定康原生质体。P. patens已被用于原生质体的产生和PEG介导的转化。在之前的实验protoplastation上展叶剑叶藓中与酶进行崩溃酶从担子菌纲（湾。等2009，;巴赫等人，2014） ...
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Author:
Date:
2015-07-20
[Abstract] Leptospira interrogans can infect a myriad of mammalian hosts, including humans (Bharti et al., 2003; Ko et al., 2009). Following acquisition by a suitable host, leptospires disseminate via the bloodstream to multiple tissues, including the kidneys, where they adhere to and colonize the proximal convoluted renal tubules (Athanazio et al., 2008). Infected hosts shed large number of spirochetes in their urine and the leptospires can survive in different environmental conditions before transmission to another host. Differential gene expression by Leptospira spp. permits adaption to these new conditions. Here we describe a protocol for the cultivation of Leptospira interrogans within Dialysis Membrane Chambers (DMCs) implanted ...
[摘要] 钩端螺旋体可以感染大量的哺乳动物宿主，包括人类（Bharti等人，2003; Ko等人，2009）。在通过合适的宿主获得后，钩端螺旋体通过血流传播到多个组织，包括肾脏，在那里它们粘附并定殖在近端的回旋肾小管上（Athanazio等人。 ，2008）。感染的宿主在其尿液中排出大量螺旋体，并且螺旋体可以在传播到另一个宿主之前在不同的环境条件下存活。钩端螺旋体的差异基因表达。允许适应这些新的条件。在这里，我们描述了植入到Sprague-Dawley大鼠的腹膜腔中的透析膜室（DMC）内培养弯曲钩端螺旋体的方案（Caimano等人，2014） 。该技术最初被开发用于研究由莱姆病螺旋体，伯氏疏螺旋体（Embrynia burgdorferi）（Akins等人，1998; Caimano，2005）研究哺乳动物适应。用于该过程的透析膜管的小孔径（8,000MWCO）允许获得宿主营养物，但排除宿主抗体和免疫效应细胞。考虑到DMC和近端回旋肾小管之间的生理和环境相似性，我们推断DMC模型将适合于通过L研究体内基因表达。 interrogans ...
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