| Tracking Lipid Transfer by Fatty Acid Isotopolog Profiling from Host Plants to Arbuscular Mycorrhiza Fungi
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Lipid transfer from host plants to arbuscular mycorrhiza fungi was hypothesized for several years because sequenced arbuscular mycorrhiza fungal genomes lack genes encoding cytosolic fatty acid synthase (Wewer et al., 2014; Rich et al., 2017). It was finally shown by two independent experimental approaches (Jiang et al., 2017; Keymer et al., 2017; Luginbuehl et al., 2017). One approach used a technique called isotopolog profiling (Keymer et al., 2017). Isotopologs are molecules, which differ only in their isotopic composition. For isotopolog profiling an organism is fed with a heavy isotope labelled precursor metabolite. Subsequently, the labelled isotopolog composition of metabolic products is analysed via mass spectrometry. The ...
[摘要] 因为测序的丛枝菌根真菌基因组缺乏编码胞质脂肪酸合酶的基因（Wewer等人，2014; Rich等人，2014），因此假定脂质从宿主植物转移到丛枝菌根真菌数年。 / em>，2017）。最终通过两种独立的实验方法（Jiang等人，2017; Keymer等人，2017; Luginbuehl等人， ）， 2017年）。一种方法使用称为同位素体谱分析的技术（Keymer等人，2017）。同位素体是分子，它们的同位素组成不同。对于同位素生物学分析，生物体被喂以重同位素标记的前体代谢物。随后，通过质谱分析代谢产物的标记同位素组成。检测到的目标代谢物的同位素体模式产生关于代谢途径和通量的信息（Ahmed et al。，2014）。以下协议描述了一个实验装置，该装置能够在由丛枝菌根真菌及其相关真菌胞外菌丝体定植的植物根中分离出脂肪酸的单独同位素分布图，以阐明两种共生生物之间的通量。我们预测，如果两种相互作用的生物体可以物理分离，则该策略还可以用于研究其他生物体之间的代谢物通量。
【背景】丛枝菌根真菌是生物营养生物。因此，它们不能独立栽培，而是依靠与寄主植物的相互作用来维持生命并完成它们的生命周期。这一特征使得研究两种共生生物，特别是单独的真菌具有挑战性。
为了培养，处理和收获与宿主根分开的真菌，开发了2室培养皿系统，并将其用于以前工作中的标记研究（Bécard和Fortin，1988; ...
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| ROS Detection in Botryococcus braunii Colonies with CellROX Green Reagent
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] We analyzed the reactive oxygen species (ROS) accumulation in the colony-forming green microalga Botryococcus braunii in response to several stress inducers such as NaCl, NaHCO3, salicylic acid (SA), methyl jasmonate, and acetic acid. A staining assay using the fluorescent dye CellROX Green was used. CellROX Green is a fluorogenic probe used for measuring oxidative stress in live cells. The dye is weakly fluorescent inside cells in a reduced state but exhibits bright green photostable fluorescence upon oxidation by ROS and subsequent binding to DNA. The large amount of liquid hydrocarbons produced and excreted by B. braunii, creates a highly hydrophobic extracellular environment that makes difficult to study short times defense responses on this microalga. The ...
[摘要] 我们分析了响应于几种胁迫诱导剂如NaCl，NaHCO 3，水杨酸（SA），茉莉酸甲酯和乙酸的菌落形成绿色微藻葡萄球菌中的活性氧（ROS）积累。 使用使用荧光染料CellROX Green的染色测定。 CellROX Green是用于测量活细胞氧化应激的荧光探针。 该染料在细胞内处于弱的荧光，但是在通过ROS氧化并随后与DNA结合时呈现出明亮的绿色光稳定荧光。 由布鲁氏杆菌生产和排泄的大量液体烃产生了高度疏水的细胞外环境，使得难以在该微藻上研究短时间的防御反应。 这里开发的程序允许我们在用不同的应激诱导剂处理细胞后，在短时间内（以分钟为单位），在这种微藻中检测ROS。
【背景】用于检测和定量过氧化氢和其他有机氢过氧化物的第一种方法是使用钛（IV）离子（MacNevin和Urone，1953）。由于钛（IV）的完成导致黄色，通过比色法检测过氧化物分子。该方法用于检测内源性过氧化物，并测定两种梨果实中的过氧化氢酶活性与果实成熟相关（Brennan和Frenkel，1977）。检测脂质氢过氧化物的另一种方法是基于硫代巴比妥酸（TBA），并用于测量诸如牛奶等食品的变质（Sidwell等，1955）。虽然该方法不使用有机溶剂，但是需要对酸化浆料进行蒸汽蒸馏来检测氢过氧化物，并且通过分光光度法定量得到的红色。上述方法具有诸如低灵敏度，与其它化合物的干扰以及可能损坏活细胞的溶剂或物质的使用等缺点。开发了一种更灵敏的方法，其中scopoletin（6-甲基-7-羟基-1,2-苯并吡喃酮）的蓝色荧光在其被过氧化物酶氧化后消失（Andreae，1955; ...
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| Extraction and Activity of O-acetylserine(thiol)lyase (OASTL) from Microalga Chlorella sorokiniana
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Date:
2017-06-20
[Abstract] O-acetylserine(thiol)lyase (OASTL) is an enzyme catalysing the reaction of inorganic sulphide with O-acetylserine to form the S-containing amino acid L-cysteine. Here we describe an improved protocol to evaluate the activity of this enzyme from the microalga Chlorella sorokiniana. It is a colorimetric assay based on the reaction between cysteine, the product of OASTL activity, and ninhydrin reagent, which forms a thiazolidine (Thz).
[摘要] O-乙酰丝氨酸（硫醇）裂解酶（OASTL）是催化无机硫化物与O-乙酰丝氨酸反应形成含S氨基酸L-半胱氨酸的酶。 在这里我们描述一个改进的方案来评估这种酶从微藻小球藻的活性。 它是基于半胱氨酸（OASTL活性的产物）和形成噻唑烷（Thz）的茚三酮试剂之间的反应的比色测定。
【背景】在古代，细菌，微藻和植物中，半胱氨酸（Cys）的合成代表了同化硫酸盐还原的决定性阶段（Hell和Wirtz，2008）。 Cys生物合成是硫同化的最后一步，由丝氨酸乙酰转移酶（SAT，EC 2.3.1.30）和O-乙酰丝氨酸（硫醇）裂解酶（OASTL，EC 4.2.99.8）催化的两个相互连接的反应进行（Salbitani等，2014 ; Carfagna等，2015）。
OASTLs催化O-乙酰丝氨酸（OAS）和硫化物之间的反应形成Cys和乙酸酯（图1）。
在血管植物中，OASTLs位于叶绿体，线粒体和胞质溶胶中，具有不同的Cys合成功能（Jost等，2000; Birke等，2013）。在微藻中，OASTLs主要在叶绿体中主要定位（Merchant et al。，2007; Bromke，2013）。然而，在小球藻Sorokiniana中，发现两种同种型，氯代和胞质OASTL，在S剥夺条件下（Carfagna等，2011）。
许多研究人员已经制定和修改了确定植物和细菌中OASTLs活性的方案（Gaitonde，1967; ...
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