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Author:
Date:
2014-06-20
[Abstract] Mycobacterium tuberculosis (Mtb) is the causative agent of tuberculosis. Analysis of proteins secreted by Mtb has been of interest to the field of tuberculosis research since certain secreted proteins interact with the host to promote virulence, while others may be important antigens or serve as biomarkers of infection. Here, we describe a protocol to prepare whole cell extracts (WCE) and short term culture filtrate (CF) from Mtb or the vaccine strain Mycobacterium bovis- bacillus Calmatte- Guérin (BCG) (Mehra et al., 2013). These are both slow growing mycobacteria, but the same basic procedure can easily be adapted to analyze secreted proteins from rapidly growing mycobacteria, such as Mycobacterium smegmatis (Msmeg), a non-pathogenic species commonly ...
[摘要] 结核分枝杆菌（Mtb）是结核病的致病因子。由Mtb分泌的蛋白质的分析已经对结核病研究领域感兴趣，因为某些分泌的蛋白质与宿主相互作用以促进毒力，而其他可能是重要的抗原或用作感染的生物标志物。在这里，我们描述了从Mtb或疫苗菌株牛分枝杆菌 - 卡介苗（BCG）制备全细胞提取物（WCE）和短期培养物滤液（CF）的方案（Mehra等人， et al。，2013）。这些都是缓慢生长的分枝杆菌，但是相同的基本程序可以容易地适于分析来自快速生长的分枝杆菌的分泌蛋白，例如耻垢分枝杆菌（Msmeg），其是实验室中常用的非致病物种。可以通过蛋白质印迹分析获得的级分，以检查感兴趣的蛋白质，或者如果抗体不可获得或通过质谱法检查整个分泌蛋白质组。所关注基因的遗传敲除突变体用作阴性对照。另外，应当在CF部分中评估胞质蛋白如分子伴侣GroEL或丙酮酸脱氢酶E2组分sucB（Rv2215/dlaT）的水平，以排除CF中的阳性信号是由于细菌裂解导致的可能性（参见图1）。通过改变菌株的生长条件，这种体外分泌测定法可用于检查改变分泌物组织的条件。我们感谢Magnus Stiegedal提供有关TCA（三氯乙酸）沉淀的有用提示。
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