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Author:
Date:
2014-06-05
[Abstract] ROS-induced DNA damage is repaired in living cells within a temporal and spatial context, and chromatin structure is critical to a consideration of DNA repair processes in situ. It’s well known that chromatin remodeling factors participate in many DNA damage repair pathways, indicating the importance of chromatin remodeling in facilitating DNA damage repair. To date, there has been no method to induce site-specific oxidative DNA damage in living cells. Therefore, it is not known whether the DNA repair mechanisms differ within active or condensed chromatin. We recently established a novel method, DTG (Damage Targeted at one Genome-site), to study DNA damage response of reactive oxygen species (ROS)-induced DNA damage in living cell at one genome loci with active or inactive ...
[摘要] ROS诱导的DNA损伤在时间和空间背景下在活细胞中修复，并且染色质结构对于原位DNA修复过程的考虑是关键的。众所周知，染色质重塑因子参与许多DNA损伤修复途径，表明染色质重塑促进DNA损伤修复的重要性。到目前为止，还没有方法诱导活细胞中的位点特异性氧化性DNA损伤。因此，不知道DNA修复机制在活性或凝集的染色质中是否不同。我们最近建立了一种新的方法，DTG（损害靶向一个基因组位点），研究活性氧（ROS）诱导的DNA损伤活动细胞中的DNA损伤反应在一个基因组活性或无活性转录。为此，我们在U2OS细胞中在X染色体上整合了四环素响应元件（TRE）盒（〜90kb）（Lan等人，2010），然后融合KillerRed（KR）刺激的ROS诱导物，其可以特异性产生ROS诱导的DNA损伤，tet-阻遏物（tetR-KR，OFF）或转录激活物（TA-KR，ON）（Lan等人， ，2014）（图1）。 TetR-KR或TA-KR分别结合TRE盒并在异源或真核细胞状态下诱导ROS损伤。如何染色质状态调节DNA损伤反应过程可以通过使用这种强大的方法来检查。
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