| Transfection and Activation of CofActor, a Light and Stress Gated Optogenetic Tool, in Primary Hippocampal Neuron Cultures
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Author:
Date:
2021-04-20
[Abstract] Proteins involved in neurodegeneration can be coupled with optogenetic reagents to create rapid and sensitive reporters to provide insight into the biochemical processes that mediate the progression of neurodegenerative disorders, including Alzheimer’s Disease (AD). We have recently developed a novel optically-responsive tool (the ‘CofActor’ system) that couples cofilin and actin (key players in early stage cytoskeletal abnormalities associated with neurodegenerative disorders) with light-gated optogenetic proteins to provide spatial and temporal resolution of oxidative and energetic stress-dependent biochemical events. In contrast to currently available small-molecule based biosensors for monitoring changes in the redox environment of the cell, CofActor is a ...
[摘要] [摘要]参与神经变性蛋白质可具有耦合光遗传学试剂来创建快速且灵敏的记者到provid Ë洞察介导的神经变性疾病，包括进展的生化过程阿尔茨海默氏病（AD）。我们最近开发了一种新型光学-响应工具（“辅”系统）夫妇COF伊林和行动中使用（与神经退行性疾病相关的早期阶段，细胞骨架异常关键球员）光门控光遗传学 蛋白质提供时空分辨率的氧化和高能应激依赖的生化事件。与目前可用的基于小分子的生物传感器来监测细胞氧化还原环境的变化相比，CofActor是一种光激活的，遗传编码的氧化还原传感器，可以通过精确的空间和时间控制来激活。在这里，我们描述了从新生小鼠制备的解离海马神经元培养物中CofActor系统的表达和激活的协议。将培养物转染用大号ipofectamine上的第五天体外（DIV5），然后暴露于细胞应激诱导刺激，导致的肌动蛋白的形成丝切蛋白可使用活细胞成像技术可以观察到杆。本文所述的方案可用于研究暴露于神经退行性刺激（例如毒性Aβ42低聚物）的活神经元中与压力相关的细胞骨架失调。此外，从AD的转基因小鼠模型和/或与KO相关的小鼠KO小鼠分离的神经元中传感器的表达可以促进我们对与神经变性相关的早期细胞骨架功能障碍的分子基础的理解。
[背景]神经变性疾病的生化标志（神经原纤维，团块和缠结，提高活性氧物质（ROS） ...
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| In vitro Co-culture of Mesenchymal Stem Cells and Endothelial Colony Forming Cells
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] The discovery of endothelial colony forming cells (ECFCs) with robust self-renewal and de novo vessel formation potentials suggests that ECFCs can be an excellent cell source for cardiovascular diseases treatment through improving neovascularization in the ischemic tissues. However, their engraftment after transplantation resulted to be low. Previous studies showed mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) could improve the survival and capillary formation capacity of ECFCs in co-culture systems. In this article, we describe a protocol for in vitro co-culture of MSCs and ECFCs to prime ECFCs for better engraftment.
[摘要] 发现具有强大自我更新和从头血管形成潜力的内皮细胞集落形成细胞（ECFCs）表明，ECFC可以通过改善缺血组织的新生血管形成，成为心血管疾病治疗的优良细胞来源。 然而，移植后的移植导致了低位移植。 以前的研究显示间充质干/基质细胞（MSC）可以改善共培养系统中ECFCs的存活和毛细管形成能力。 在这篇文章中，我们描述了体外协调MSCs和ECFCs共同培养ECFC以实现更好的移植。
【背景】内皮祖细胞（EPC）被定义为能够通过血管发生过程形成新血管的细胞群。 2004年，Ingram等人鉴定了来自人脐带血的称为“内皮细胞集落形成细胞（ECFC）”的离体培养物中的特异性高度增殖的EPC群体Ingram等人，2004），并且这些细胞最近被宣布代表EPCs（Medina等人，2017）。类似的群体也可以从具有等效血管化潜力和临床相关数量的人类胎盘组织中分离（Patel等人，2013; Shafiee等人，2015） ）。因此，ECFC移植已被提出作为缺血性疾病如心肌梗塞或关键性腿部缺血的治疗方法。然而，移植后的ECFCs植入物和血管生成潜力被证明是低的（Shafiee等人，2017; ...
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| Isolation and Purification of Schwann Cells from Spinal Nerves of Neonatal Rat
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] Primary cultured Schwann cells (SCs) are widely used in the investigation of the biology of SC and are important seed cells for neural tissue engineering. Here, we describe a novel protocol for harvesting primary cultured SCs from neonatal Sprague-Dawley (SD) rats. In the present protocol, dissociated SCs are isolated from the spinal nerves of neonatal rats and purified by the treatment of cytosine arabinoside (AraC).
[摘要] 原代培养的雪旺氏细胞（SCs）广泛用于SC的生物学研究，是神经组织工程的重要种子细胞。 在这里，我们描述了从新生Sprague-Dawley（SD）大鼠中收获原代培养的SC的新方案。 在本方案中，解离的SCs从新生大鼠的脊神经中分离并通过治疗阿糖胞苷（AraC）进行纯化。
【背景】SC是周围神经系统（PNS）的神经胶质细胞。主要SCs的分离和纯化是研究SC生物学的关键步骤。此外，纯化的原代培养的SC是用于神经组织工程的重要种子细胞。迄今为止，已经基于Brockes（Brockes等人，1979）的方法报道了培养SC的各种方法。通过报道的方法，坐骨神经主要用于SC隔离，因为它们尺寸大并且可以容易地获得。然而，坐骨神经的SC容易被成纤维细胞污染，因为结缔组织难以清除。特别是神经管和神经束是成纤维细胞的主要来源。没有特殊处理，污染的成纤维细胞比SCs快得多，并且将很快成为培养物中主要的细胞。在过去几十年中，已经开发出许多用于从污染成纤维细胞中分离SC的纯化方法。这些纯化方法的细节包括单一或组合的抗有丝分裂处理（Wood，1976），抗体介导的细胞溶解（Brockes等人，1979），免疫选择（Assouline等人，，1983; ...
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