| Ex vivo Culture of Adult Mouse Antral Glands
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] The tri-dimensional culture, initially described by Sato et al. (2009) in order to isolate and characterize epithelial stem cells of the adult small intestine, has been subsequently adapted to many different organs. One of the first examples was the isolation and culture of antral stem cells by Barker et al. (2010), who efficiently generated organoids that recapitulate the mature pyloric epithelium in vitro. This ex vivo approach is suitable and promising to study gastric function in homeostasis as well as in disease. We have adapted Barker’s protocol to compare homeostatic and regenerating tissues and here, we meticulously describe, step by step, the isolation and culture of antral glands as well as the isolation of single cells from antral glands that ...
[摘要] 为了分离和表征成年小肠的上皮干细胞，最初由Sato等人（2009）描述的三维培养物已经随后适应于许多不同的器官。其中一个例子是Barker等人（2010）分离和培养窦性干细胞，他们有效地产生了在体外重现成熟幽门上皮的组织细胞。这种“离体”方法是适合的，并且有希望研究体内平衡和疾病中的胃功能。我们已经调整了Barker的方案来比较稳态和再生组织，这里，我们一步一步地仔细地描述了窦腺的分离和培养，以及从细胞分选后可能用于培养的窦腺中分离单细胞一个例子（Fernandez Vallone等人，2016）。
背景来自腺体的小鼠成体干细胞可以在3D matrigel中离体生长，作为“迷你腺体”无限期（Barker等人，2010） 。与EGF，Noggin和R-spondin 1存在下生长的小鼠成年小肠的干细胞相比，胃干细胞需要进一步补充Fgf10，胃泌素，Wnt3a和更高浓度的R-螺旋菌素1（称为作为ENRFGW）获得生产性文化。直到最近，在干细胞消融后，在离体培养系统中成体再生窦腺是否生长，如果是这样，仍然是未知的。使用本方案，证明了内源性和再生的腺体在接种时不会类似地生长并且表现出不同的生长培养要求。
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| Ex vivo Culture of Fetal Mouse Gastric Epithelial Progenitors
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Isolation and tridimensional culture of murine fetal progenitors from the digestive tract represents a new approach to study the nature and the biological characteristics of these epithelial cells that are present before the onset of the cytodifferentiation process during development. In 2013, Mustata et al. described the isolation of intestinal fetal progenitors growing as spheroids in the ex vivo culture system initially implemented by Sato et al. (2009) to grow adult intestinal stem cells. Noteworthy, fetal-derived spheroids have high self-renewal capacity making easy their indefinite maintenance in culture. Here, we report an adapted protocol for isolation and ex vivo culture and maintenance of fetal epithelial progenitors from distal pre-glandular ...
[摘要] 来自消化道的鼠胎儿祖细胞的分离和三维培养代表了研究在发育过程中细胞分化过程开始前存在的这些上皮细胞的性质和生物学特征的新方法。在2013年，Mustata等人描述了在最初由佐藤等人实施的离体培养系统中分离作为球体生长的肠胎细胞祖细胞。 >（2009）增长成年肠干细胞。值得注意的是，胎儿衍生的球体具有较高的自我更新能力，使其在文化中的无限期维护变得容易。在这里，我们报告了用于分离和远离前胃腺胃生长为胃球体的胎儿上皮祖细胞的分离和离体培养和维持的修改方案（Fernandez Vallone等人， 2016）。
背景 来自腺体的小鼠成体干细胞可以在3D matrigel中离体生长，作为“迷你腺体”无限期（Barker等人，2010） 。与在EGF，Noggin和R-spondin 1存在下生长的小肠的干细胞相比，成年胃干细胞需要进一步补充Fgf10，胃泌素，Wnt3a和更高浓度的R-spondin 1以获得生产性 - 文化。相比之下，到目前为止，很少知道在发育期间排列前腺上皮细胞的胎儿细胞。到目前为止，它们的性质以及其离体的潜在生长特性未明确。基于以前的研究，确定胎儿小肠（Mustata等人，2013年）中存在的细胞，我们报告了作为球体的小鼠胎儿胃祖细胞的培养（Fernandez Vallone et al。 。，2016）。可以在2009年由佐藤等人先前报道的培养基中重复胃祖细胞以生长小肠成体干细胞，与成人型胃干细胞相反，它们不需要额外的生长因子补充（Fgf10，Wnt3a或胃泌素）。 ...
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| Construction of Human Monocyte Derived Macrophages Armed with Oncolytic Viruses
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Author:
Date:
2013-07-05
[Abstract] Macrophages are involved in many key physiological processes and complex responses such as inflammatory, immunological, infectious and neoplastic diseases. The appearance and activation of macrophages are thought to be rapid events in the development of many pathological lesions, including malignant tumours, atherosclerotic plaques, and arthritic joints. This has prompted recent attempts to use macrophages as novel cellular vehicles for gene therapy, in which macrophages are genetically modified ex vivo and then reintroduced into the body with the hope that a proportion will then home to the diseased site. Here, we describe a protocol for preparing monocyte-derived macrophages (MDM) and arming these with oncolytic viruses (OV) as a novel way for delivering anti-cancer therapies. ...
[摘要] 巨噬细胞参与许多关键的生理过程和复杂的反应，例如炎症，免疫，感染和肿瘤疾病。巨噬细胞的出现和活化被认为是许多病理损伤的发展中的快速事件，包括恶性肿瘤，动脉粥样硬化斑块和关节炎性关节。这已经促使最近尝试使用巨噬细胞作为用于基因治疗的新型细胞载体，其中巨噬细胞在体外进行遗传修饰，然后重新引入体内，希望一部分随后归巢到患病部位。在这里，我们描述了制备单核细胞衍生的巨噬细胞（MDM）和武装与溶瘤病毒（OV）作为一种新的方式提供抗癌治疗的协议。在这种方法中，使用来自TARP的前列腺特异性启动子元件将与缺氧调节的E1A/B构建体和E1A依赖性溶瘤腺病毒共转导的巨噬细胞的增殖限制于前列腺肿瘤细胞， ， ，2011; Muthana等人。当这种共转导的细胞到达极端缺氧区域（如在肿瘤中发现的）时，E1A/B蛋白被表达，从而激活腺病毒的复制。该病毒随后被宿主巨噬细胞释放并感染相邻的肿瘤细胞。然后病毒感染邻近细胞，但仅在前列腺肿瘤细胞中增殖并且是细胞毒性的。 OV通过许多机制杀死癌细胞，包括直接裂解，凋亡，自噬和蛋白质合成的关闭，以及诱导抗肿瘤免疫。使用巨噬细胞递送OV确保它们被保护免于在循环中面临的许多危险，包括中和抗体，补体激活和其他组织例如肝和脾的非特异性摄取。
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