| Assessment of Cellular Redox State Using NAD(P)H Fluorescence Intensity and Lifetime
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Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract] NADH and NADPH are redox cofactors, primarily involved in catabolic and anabolic metabolic processes respectively. In addition, NADPH plays an important role in cellular antioxidant defence. In live cells and tissues, the intensity of their spectrally-identical autofluorescence, termed NAD(P)H, can be used to probe the mitochondrial redox state, while their distinct enzyme-binding characteristics can be used to separate their relative contributions to the total NAD(P)H intensity using fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM). These protocols allow differences in metabolism to be detected between cell types and altered physiological and pathological states.
[摘要] NADH和NADPH分别是分解代谢和合成代谢过程的氧化还原辅因子。此外，NADPH在细胞抗氧化防御中起着重要作用。在活细胞和组织中，其光谱相同的自发荧光（称为NAD（P）H）的强度可用于探测线粒体氧化还原状态，而其不同的酶结合特征可用于将其相对贡献与总共分离使用荧光寿命成像显微镜（FLIM）的NAD（P）H强度。这些方案允许在细胞类型和改变的生理和病理状态之间检测代谢的差异。
背景 氧化还原辅因子烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）及其磷酸化对应物NADPH的还原形式本质上是荧光的，两者都吸收波长为340（±30）nm并在460（±50）nm处发射的光（Patterson等人。，2000）。这些光谱特征在氧化成NAD（上标+）或NADP（superson），（2007））时损失。单独的NAD和NADP池的氧化还原平衡决定了对比的代谢过程（Ying，2008），如图1所示。NAD作为电子受体，用于通过三羧酸氧化线粒体中的糖，脂质和氨基酸底物（TCA）循环，并作为内线粒体膜（IMM）上的电子传递链（ETC）的电子供体，促使将质子泵送到膜间隙中，作为合成三磷酸腺苷（ATP）的电源，通过F 1 F 0 O 3 ATP合成酶（Osellame等人，2012）。因此，线粒体中NADH与NAD + 的平衡反映了TCA循环与ETC活性的平衡。 ...
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| Construction of Human Monocyte Derived Macrophages Armed with Oncolytic Viruses
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Author:
Date:
2013-07-05
[Abstract] Macrophages are involved in many key physiological processes and complex responses such as inflammatory, immunological, infectious and neoplastic diseases. The appearance and activation of macrophages are thought to be rapid events in the development of many pathological lesions, including malignant tumours, atherosclerotic plaques, and arthritic joints. This has prompted recent attempts to use macrophages as novel cellular vehicles for gene therapy, in which macrophages are genetically modified ex vivo and then reintroduced into the body with the hope that a proportion will then home to the diseased site. Here, we describe a protocol for preparing monocyte-derived macrophages (MDM) and arming these with oncolytic viruses (OV) as a novel way for delivering anti-cancer therapies. ...
[摘要] 巨噬细胞参与许多关键的生理过程和复杂的反应，例如炎症，免疫，感染和肿瘤疾病。巨噬细胞的出现和活化被认为是许多病理损伤的发展中的快速事件，包括恶性肿瘤，动脉粥样硬化斑块和关节炎性关节。这已经促使最近尝试使用巨噬细胞作为用于基因治疗的新型细胞载体，其中巨噬细胞在体外进行遗传修饰，然后重新引入体内，希望一部分随后归巢到患病部位。在这里，我们描述了制备单核细胞衍生的巨噬细胞（MDM）和武装与溶瘤病毒（OV）作为一种新的方式提供抗癌治疗的协议。在这种方法中，使用来自TARP的前列腺特异性启动子元件将与缺氧调节的E1A/B构建体和E1A依赖性溶瘤腺病毒共转导的巨噬细胞的增殖限制于前列腺肿瘤细胞， ， ，2011; Muthana等人。当这种共转导的细胞到达极端缺氧区域（如在肿瘤中发现的）时，E1A/B蛋白被表达，从而激活腺病毒的复制。该病毒随后被宿主巨噬细胞释放并感染相邻的肿瘤细胞。然后病毒感染邻近细胞，但仅在前列腺肿瘤细胞中增殖并且是细胞毒性的。 OV通过许多机制杀死癌细胞，包括直接裂解，凋亡，自噬和蛋白质合成的关闭，以及诱导抗肿瘤免疫。使用巨噬细胞递送OV确保它们被保护免于在循环中面临的许多危险，包括中和抗体，补体激活和其他组织例如肝和脾的非特异性摄取。
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