| FRAP: A Powerful Method to Evaluate Membrane Fluidity in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) is probably the most direct method to investigate the dynamics of molecules in living cells. Here, we describe FRAP to quantify membrane fluidity in C. elegans. Using FRAP, we have shown that cold, glucose and exogenous saturated fatty acids can decrease the fluidity of cellular membranes in certain mutants.
[摘要] FRAP（光漂白后的荧光恢复）可能是研究活细胞中分子动力学的最直接方法。 在这里，我们描述FRAP来量化 C中的膜流动性。线虫。 使用FRAP，我们已经表明冷，葡萄糖和外源饱和脂肪酸可以降低某些突变体中细胞膜的流动性。
【背景】生物膜，定义所有细胞的特征，主要由磷脂组成（Van Meer 等人，，2008）。存在于磷脂双层中的脂肪酸物质极大地影响其性质。例如，高饱和脂肪酸含量增加了膜的刚性，而高不饱和脂肪酸含量促进了流动性（Pilon，2016）。细胞膜的脂肪酸组成通常与膳食脂肪的组成明显相关，膳食脂肪可直接掺入磷脂中（Abbott et al。，2012; Dancy et al。，2015）。然而，考虑到饮食中存在广泛的变化，细胞必须具有调节机制，监测和调节膜组成并获得所需的膜性质，例如流动性，曲率，厚度，等等。使用FRAP对在肠道细胞中表达prenylated GFP的蠕虫，我们先前已经证明，缺乏PAQR-2（哺乳动物脂联素受体的同源物）的突变体在葡萄糖或富含饱和脂肪的饮食中培养时降低了膜流动性。酸（Svensk et al。，2016; Devkota et ...
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| Real-time Analysis of Auxin Response, Cell Wall pH and Elongation in Arabidopsis thaliana Hypocotyls
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Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract] The rapid auxin-triggered growth of the Arabidopsis hypocotyls involves the nuclear TIR1/AFB-Aux/IAA signaling and is accompanied by acidification of the apoplast and cell walls (Fendrych et al., 2016). Here, we describe in detail the method for analysis of the elongation and the TIR1/AFB-Aux/IAA-dependent auxin response in hypocotyl segments as well as the determination of relative values of the cell wall pH.
[摘要] 拟南芥下胚轴的快速生长素触发的生长涉及核TIR1 / AFB-Aux / IAA信号传导并伴随质外体和细胞壁的酸化（Fendrych 等，2016）。 在这里，我们详细描述了在下胚轴节段中的延伸和TIR1 / AFB-Aux / IAA依赖性生长素响应的分析方法以及细胞壁pH的相对值的确定。
【背景】植物激素生长素诱导拟南芥下胚轴的快速生长。 这个过程需要TIR1 / AFB-Aux / IAA生长素共同受体。 生长素促进TIR1 / AFB和Aux / IAA的结合，导致后者的泛素化和降解，并导致生长素应答基因的转录。 这个协议的重点是测量拟南芥下胚轴的生长，生长素信号和细胞壁酸化。 该协议是基于以前Schenck等人的工作，2010年，Takahashi等人，2012年，Fraas 等人，2014年 和Spartz 等。，2014; 但与已发表的工作不同，我们描述了能够测量下胚轴生长期间发生的更大范围过程的程序; 从肉眼可见的器官伸长，通过共焦显微镜监测的细胞壁pH到通过荧光素酶生物发光显现的实时核生长素信号传导。
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| Fluorescence in situ Localization of Gene Expression Using a lacZ Reporter in the Heterocyst-forming Cyanobacterium Anabaena variabilis
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] One of the most successful fluorescent proteins, used as a reporter of gene expression in many bacterial, plant and animals, is green fluorescent protein and its modified forms, which also function well in cyanobacteria. However, these fluorescent proteins do not allow rapid and economical quantitation of the reporter gene product, as does the popular reporter gene lacZ, encoding the enzyme β-galactosidase. We provide here a protocol for the in situ localization of β-galactosidase activity in cyanobacterial cells. This allows the same strain to be used for both a simple, quantitative, colorimetric assay with the substrate ortho-nitrophenyl-β-galactoside (ONPG) and for sensitive, fluorescence-based, cell-type localization of gene expression using ...
[摘要] 在许多细菌，植物和动物中用作基因表达的报告基因的最成功的荧光蛋白之一是绿色荧光蛋白及其修饰形式，其在蓝细菌中也起良好作用。然而，与编码β-半乳糖苷酶的流行的报道基因lacZ一样，这些荧光蛋白不允许报道基因产物的快速和经济的定量。我们在这里提供了在蓝细菌细胞中原位β-半乳糖苷酶活性定位的方案。这允许将相同的菌株用于具有底物邻硝基苯基-β-半乳糖苷（ONPG）的简单，定量，比色测定，并且用于灵敏的，基于荧光的细胞型定位使用5-十二烷酰氨基荧光素二-β-D-吡喃半乳糖苷（C12-FDG）的基因表达。
背景 鱼腥藻变种是一种丝状蓝细菌，其区分称为异养细胞的特异性细胞，其特异性用于固氮（Kumar等人，2010; Maldener and Muro Pastor，2010）。由于在96孔中易于定量，酶，比色，β-半乳糖苷酶测定，我们使用大肠埃希氏菌的 lacZ 基因作为蓝细菌基因表达的转录报告基因（Griffith和Wolf，2002）和使用相同的菌株用于使用荧光底物5-十二烷基聚氨基荧光素二-β-D-吡喃半乳糖苷（C12-FDG）的原位定位基因表达的能力（ Thiel等人，1995; ...
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