| RNA Extraction from Wistar Rat Cochlea for qRT-PCR
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Otology research has developed considerably in recent years and molecular analysis is crucial to identify metabolic pathways and therapeutic targets. However, the structure of the cochlea limits the amount of cell mass, and special care is required for RNA extraction. Studies applying this technique to the cochlea are scarce in the literature, and difficulties in this area exist. In the context, we describe a method for extracting RNA in Wistar rats for qRT-PCR analyses in order to clarify certain aspects and obtain good quality material.
[摘要] 近年来，耳科学研究发展迅速，分子分析对鉴定代谢途径和治疗靶点至关重要。 然而，耳蜗的结构限制了细胞的数量，特别注意RNA提取。 在耳蜗中使用这种技术的研究在文献中很少，而且在这方面存在困难。 在此背景下，我们描述了提取Wistar大鼠的RNA进行qRT-PCR分析的方法，以澄清某些方面并获得优质的材料。
【背景】了解涉及毛细胞损伤的分子机制对于保持听力非常重要。 来自mRNA的qRT-PCR用于代谢途径和可能的治疗靶标的研究。 耳科学研究通常使用小型啮齿动物，尽管用保存良好的RNA分离感觉细胞样品用于转录分析是一个重大挑战。 用这些动物进行的研究已经提出了在新生儿耳蜗中提取RNA的有效方法，然而，由于少量mRNA的回收，成年耳蜗呈现局限性。 为了评估获得的RNA的质量，可以进行紫外吸收和琼脂糖凝胶电泳。 在此，我们描述了从成年Wistar大鼠获得mRNA的方法，其随后可用于qRT-PCR测定。
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| Expression, Purification and Enzymatic Assay of Plant Histone Deacetylases
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Author:
Date:
2016-04-05
[Abstract] Histone deacetylases (HDACs) catalyzing the removal of acetyl groups from lysine residues of histone and non-histone proteins play vital roles in regulation of gene transcription. In plants, HDACs can be grouped into three families, including RPD3-type, SIR2-type and plant specific HD2-type HDACs. Here we describe a method to determine plant HDAC enzymatic activity. This protocol includes expression, purification and enzymatic activity assay of recombinant plant HDACs expressed in Escherichia coli (E. coli) and Arabidopsis thaliana (A. thaliana).
[摘要] 组蛋白脱乙酰酶（HDAC）催化从组蛋白和非组蛋白蛋白的赖氨酸残基去除乙酰基在调节基因转录中起重要作用。 在植物中，HDAC可以分为三个家族，包括RPD3型，SIR2型和植物特异性HD2型HDAC。 在这里我们描述了一种确定植物HDAC酶活性的方法。 该方案包括在大肠杆菌（大肠杆菌）和拟南芥（）中表达的重组植物HDAC的表达，纯化和酶活性测定 >拟南芥）。
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