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Date:
2015-12-05
[Abstract] The performance of the carbon-fixing enzyme, ribulose 1, 5-bisphosphate carboxylase/oxygenase (EC 4.1.1.39, Rubisco), controls biomass accumulation in green plants, algae and most autotrophic bacteria. In particular, the carboxylase activity of Rubisco incorporates carbon from CO2 to ribulose 1, 5-bisphosphate (RuBP) producing two molecules of 3-phosphoglycerate. Here a detailed protocol is given for the assay of the carboxylase activity of Rubisco from Chlamydomonas reinhardtii, a model organism for chloroplast studies and a fitting host for biotechnologically oriented genetic manipulation of the enzyme. Rubisco has to be pre-incubated with Mg2+ ions and bicarbonate to induce the catalytically competent active center (Laing and Christeller, 1976). Once ...
[摘要] 碳固定酶，核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶（EC 4.1.1.39，Rubisco）的性能控制绿色植物，藻类和大多数自养细菌中的生物量积累。特别地，Rubisco的羧化酶活性掺入来自CO 2的碳到产生两分子3-磷酸甘油酸的核酮糖1,5-二磷酸（RuBP）。这里给出了用于来自莱茵衣藻的Rubisco的羧化酶活性的测定的详细方案，其是用于叶绿体研究的模式生物体和用于生物技术定向的酶的遗传操作的拟合宿主。 Rubisco必须与Mg 2+离子和碳酸氢盐预孵育以诱导催化活性中心（Laing和Christeller，1976）。一旦Rubisco被活化，本文所述的其羧化酶活性的测定基于将14 C-二氧化碳/碳酸氢盐固定在耐酸放射性中（Lorimer等人， ，1977）。虽然也可以使用分光光度测定法（Lilley和Walker，1974），但是当处理大量样品时，基于放射性底物固定的方法是不可替代的，并且它仍然是最常用于测定Rubisco活性的技术。
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