| Rubisco Extraction and Purification from Diatoms
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Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] This protocol describes a method to extract ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase oxygenase (Rubisco) from diatoms (Bacillariophyta) to determine catalytic performance. This protocol has been adapted from use in cyanobacteria and higher plants (Andrews, 1988; Whitney and Sharwood, 2007). First part (steps A1-A3) of the extraction provides a crude extract of Rubisco that is sufficient for carboxylation assays to measure the Michaelis constant for CO2 (KC) and the catalytic turnover rate (kcatc). However, the further purification steps outlined (steps B1-B4) are needed for measurements of Rubisco CO2/O2 Specificity (SC/O, [Kane et al., 1994]).
[摘要] 该方案描述了从硅藻（“芽孢杆菌”）提取核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶加氧酶（Rubisco）的方法以确定催化性能。该方案已经在蓝细菌和高等植物中得到了应用（Andrews，1988; Whitney and Sharwood，2007）。提取的第一部分（步骤A1-A3）提供Rubisco的粗提取物，其足以用于羧化测定以测量CO 2（K 3 C）的Michaelis常数和催化更换率（ k c ）。然而，为了测量Rubisco CO 2 / O 2特异性（S C / O ）需要进一步的纯化步骤（步骤B1-B4） >，[Kane等人，1994]）。背景 核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶加氧酶（Rubisco，EC 4.1.1.39）催化了CO 2光合同化的第一步，因此在光合作用和全球碳循环中起着重要的作用。 Rubisco已经从古菌，细菌，藻类和植物的各种生物体中分离出来，并且在生物体之间显示出各种各样的动力学（Galmes等人，2014年; Tcherkez等人，2006; Whitney等人，2011）。 Rubisco动力学的知识是了解光合作用以及因此碳的生物沉积物对人为CO ...
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| Assay of the Carboxylase Activity of Rubisco from Chlamydomonas reinhardtii
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Author:
Date:
2015-12-05
[Abstract] The performance of the carbon-fixing enzyme, ribulose 1, 5-bisphosphate carboxylase/oxygenase (EC 4.1.1.39, Rubisco), controls biomass accumulation in green plants, algae and most autotrophic bacteria. In particular, the carboxylase activity of Rubisco incorporates carbon from CO2 to ribulose 1, 5-bisphosphate (RuBP) producing two molecules of 3-phosphoglycerate. Here a detailed protocol is given for the assay of the carboxylase activity of Rubisco from Chlamydomonas reinhardtii, a model organism for chloroplast studies and a fitting host for biotechnologically oriented genetic manipulation of the enzyme. Rubisco has to be pre-incubated with Mg2+ ions and bicarbonate to induce the catalytically competent active center (Laing and Christeller, 1976). Once ...
[摘要] 碳固定酶，核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶（EC 4.1.1.39，Rubisco）的性能控制绿色植物，藻类和大多数自养细菌中的生物量积累。特别地，Rubisco的羧化酶活性掺入来自CO 2的碳到产生两分子3-磷酸甘油酸的核酮糖1,5-二磷酸（RuBP）。这里给出了用于来自莱茵衣藻的Rubisco的羧化酶活性的测定的详细方案，其是用于叶绿体研究的模式生物体和用于生物技术定向的酶的遗传操作的拟合宿主。 Rubisco必须与Mg 2+离子和碳酸氢盐预孵育以诱导催化活性中心（Laing和Christeller，1976）。一旦Rubisco被活化，本文所述的其羧化酶活性的测定基于将14 C-二氧化碳/碳酸氢盐固定在耐酸放射性中（Lorimer等人， ，1977）。虽然也可以使用分光光度测定法（Lilley和Walker，1974），但是当处理大量样品时，基于放射性底物固定的方法是不可替代的，并且它仍然是最常用于测定Rubisco活性的技术。
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