| Electro-fusion of Gametes and Subsequent Culture of Zygotes in Rice
|
|
Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] Electro-fusion system with isolated gametes has been utilized to dissect fertilization-induced events in angiosperms, such as egg activation, zygote development and early embryogenesis, since the female gametophytes of plants are deeply embedded within ovaries. In this protocol, procedures for isolation of rice gametes, electro-fusion of gametes, and culture of the produced zygotes are described.
[摘要] 已经利用具有孤立配子的电融合系统来解剖被子植物中受精诱导的事件，例如卵活化，合子发育和早期胚胎发生，因为植物的雌配子体深深嵌入卵巢内。在该方案中，描述了分离水稻配子，配子电融合和产生的受精卵培养的程序。
背景 被子植物的受精和后续事件，如胚胎发生和胚乳发育，发生在深入嵌入卵母细胞的胚囊中（Nawaschin，1898; Guignard，1899; Russell，1992; Raghavan，2003）。因此，分离的配子已被用于体外受精（IVF）系统，以观察和分析受精和后处理过程（Wang等人，2006年）。用于被子植物的IVF系统包括三种基本微技术的组合：（i）男性和女性配子的分离和选择; （ii）配对对和（iii）单细胞培养物的融合（Kranz，1999）。已经在广泛的植物物种中建立了分离活的配子的程序，包括单子叶植物和双子叶植物（综述于Kranz，1999和Okamoto，2011）。分离的配子可以电融合（Kranz等人，1991; Uchiumi等人，2006和2007）或化学地使用钙（Faure等人，1994; Kranz和Lörz，1994; Khalequzzaman和Haq，2005），聚乙二醇（Sun等，1995; ...
|
|
|
| Vacuole Structure Analysis during Cell Death Subsequent to Application of Erwinia carotovora Culture Filtrates to Cell Cultures of Nicotiana tabacum
|
|
Author:
Date:
2015-10-20
[Abstract] We recently established an experimental model system for efficient defense-related cell death using tobacco BY-2 cultured cells treated with culture filtrates of the pathogenic bacterium Erwinia carotovora (E. carotovora) (Hirakawa et al., 2015). Applying this experimental system to transgenic BY-2 cells stably expressing the vacuolar membrane marker GFP-VAM3 (Kutsuna and Hasezawa, 2002) allowed us to monitor changes in vacuolar membrane structures including a decrease of transvacuolar strands during cell death (Hirakawa et al., 2015). Our model system can help to investigate organelle dynamics in defense-related cell death. Here, we show protocol for applying E. carotovora filtrates to BY-2 cells and confocal observation of vacuolar membrane ...
[摘要] 我们最近建立了使用烟草BY-2培养细胞的有效防御相关细胞死亡的实验模型系统，所述培养细胞用致病性细菌欧文氏菌（Erwinia carotovora）（ E。carotovora （Hirakawa ，，2015）。将该实验系统应用于稳定表达液泡膜标记物GFP-VAM3的转基因BY-2细胞（Kutsuna和Hasezawa，2002），使我们能够监测液泡膜结构的变化，包括细胞死亡期间跨血管链的减少（Hirakawa et al。 al。，2015）。我们的模型系统可以帮助调查细胞器动力学在国防相关的细胞死亡。在这里，我们显示应用 E的协议。 carotovora过滤到BY-2细胞和共聚焦观察液泡膜动力学和随后的细胞死亡。我们使用细胞周期同步的BY-2细胞来有效地监测内陷的液泡膜，例如在我们最近的报告中的跨血管链（Hirakawa等人，2015）;然而，我们不描述本文中的细胞周期同步的协议。对于BY-2细胞同步的逐步方案，请参考先前的方案论文（Nagata和Kumagai，1999; Kumagai-Sano等人，2006）。
|
|
|