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Author:
Date:
2015-09-05
[Abstract] All bacteria that live in oxygenated environments have to deal with oxidative stress caused by some form of exogenous or endogenous reactive oxygen species (ROS) (Imlay, 2013). Large quantities of ROS damage DNA, lipids and proteins which can eventually lead to bacterial cell death (Imlay, 2013). In contrast, smaller quantities of ROS can play more sophisticated roles in cellular signalling pathways affecting almost every process in the bacterial cell e.g. metabolism, stress responses, transcription, protein synthesis, etc. Previously, inadequate analytical methods prevented appropriate analysis of the intra-bacterial redox potential. Herein, we describe a method for the measurement of real-time changes to the intra-bacterial redox potential using redox-sensitive GFP ...
[摘要] 所有存在氧合环境中的细菌都必须处理由某种形式的外源性或内源性活性氧（ROS）引起的氧化应激（Imlay，2013）。大量的ROS损伤DNA，脂质和蛋白质，其可以最终导致细菌细胞死亡（Imlay，2013）。相反，较少量的ROS可以在细胞信号传导途径中发挥更复杂的作用，影响几乎细菌细胞中的每一个过程，例如，代谢，应激反应，转录，蛋白质合成等 。以前，不充分的分析方法阻止了细菌内氧化还原电位的适当分析。在本文中，我们描述了使用氧化还原敏感性GFP（roGFP2）测量细菌内氧化还原电位的实时变化的方法（van der Heijden等人，2015）。 roGFP2蛋白被工程改造成含有特定的半胱氨酸残基，其在氧化时形成内部二硫键，导致蛋白构象的轻微改变（Hanson等人，2004）。这种移位导致两种不同的蛋白质同种型在分别在405nm和480nm下激发后具有不同的荧光激发光谱。因此，相应的405/480nm比率可以用作细菌内氧化还原电位的量度。比率量度分析排除了由于roGFP2浓度差异引起的变化，并且由于构象变化是可逆的，因此系统允许测量氧化以及还原条件。在该方案中，我们通过测量鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌）内的细菌内氧化还原电位来描述该系统，但该系统可以调整用于其他革兰氏阴性菌。
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