| Whole-mount Immunohistochemistry of Adult Zebrafish Retina for Advanced Imaging
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Author:
Date:
2020-12-20
[Abstract] Immunohistochemistry is a widely used technique to examine the expression and subcellular localization of proteins. This technique relies on the specificity of antibodies and requires adequate penetration of antibodies into tissues. The latter is especially challenging for thick specimens, such as embryos and other whole-mount preparations. Here we describe an improved method of immunohistochemistry for retinal whole-mount preparations. We report that a cocktail of three reagents, Triton X-100, Tween-20, and DMSO, in blocking and antibody dilution buffers strongly enhances immunolabeling in whole-mount retinas from adult zebrafish. In addition, we establish that in whole retinal tissues, a classic epitope retrieval method, based on citrate buffer, is effective for immunolabeling ...
[摘要] Abstra CT ]免疫组织化学是一种广泛使用的技术来检验表达和蛋白质的亚细胞定位。该技术依赖于抗体的特异性，并且需要抗体充分渗透到组织中。对于厚的标本，例如胚胎和其他整装样品，后者尤其具有挑战性。在这里，我们描述了一种用于视网膜整装制剂的免疫组织化学的改进方法。我们报告说，三种试剂鸡尾酒，曲通X - 封闭和抗体稀释缓冲液中的100，Tween-20和DMSO强烈增强了成年斑马鱼整个视网膜中的免疫标记。此外，我们建立了在整个视网膜组织中，基于柠檬酸盐缓冲液的经典表位检索方法，可以有效地免疫标记膜相关蛋白。总的来说，这种简单的修饰可以对视网膜整装中的蛋白质进行精确且可重复的免疫标记。
[背景]为了理解复杂的生物过程，形态学和组织学分析能够进行切合实际的定性和quantitativ ë接近。免疫组织化学是一种用于可视化细胞内和细胞外蛋白表达和定位的强大技术。尽管常规组织学切片可提供高分辨率的免疫染色蛋白图像，但对3维组织进行切片会导致组织结构保存不佳。在各节中，不容易理解完整的细胞结构和对蛋白质3维分布的完整理解。相反，整装制剂可提供大量3D信息，包括完整的细胞结构以及复杂组织中细胞和分子的空间关系。然而，使免疫组织化学适合与完整组织一起使用通常会导致抗体的渗透性差，导致标记不完全和高度的非特异性背景。
在视网膜，径向M的细胞体ü米勒胶质细胞跨度视网膜的整个厚度（Bringmann等人，2006）。小胶质细胞是中枢神经系统的先天免疫细胞，具有小的细胞体和分叉的过程，分布在整个视网膜实质中（Li等人，2015; ...
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| Generation of Luciferase-expressing Tumor Cell Lines
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Murine tumor models have been critical to advances in our knowledge of tumor physiology and for the development of effective tumor therapies. Essential to these studies is the ability to both track tumor development and quantify tumor burden in vivo. For this purpose, the introduction of genes that confer tumors with bioluminescent properties has been a critical advance for oncologic studies in rodents. Methods of introducing bioluminescent genes, such as firefly luciferase, by viral transduction has allowed for the production of tumor cell lines that can be followed in vivo longitudinally over long periods of time. Here we describe methods for the production of stable luciferase expressing tumor cell lines by lentiviral transduction.
[摘要] 鼠肿瘤模型对于我们对肿瘤生理学知识和有效肿瘤治疗方法发展的进展至关重要。 这些研究的关键是能够跟踪肿瘤发展并量化体内肿瘤负荷。 为此，引入赋予肿瘤生物发光特性的基因已经成为啮齿动物肿瘤研究的重要进展。 通过病毒转导引入生物发光基因（例如萤火虫萤光素酶）的方法已经允许产生可以在体内纵向长时间地进行的肿瘤细胞系。 在这里我们描述了通过慢病毒转导产生稳定表达荧光素酶的肿瘤细胞系的方法。
【背景】体内跟踪细胞最重要的是能够通过微创方法从外部检测它们。使用来自萤火虫的荧光素酶（Photinus pyralis ）的酶促生物发光是用于体内基于图像的细胞追踪的广泛使用的方法。生物发光已被用于各种体内应用，包括报告基因表达的无创成像（Herschman，2004），研究昼夜节律（Southern and Millar，2005），成像脑卒中（Vandeputte
萤火虫荧光素酶氧化物萤光素在分子氧，镁和三磷酸腺苷存在下在560nm产生黄绿色光（Wilson和Hastings，1998; ...
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| Small-scale DNA Extraction Method for Maize and Other Plants
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2018-03-20
[Abstract] Corn, or maize, is a major cereal crop and model monocot. Two of its benefits are ease of pollination and tractable genetics. For a comparison of development between maize and the dicot model, Arabidopsis, see Lunde and Hake, 2005. For an example of how this protocol might be used for a double mutant analysis see Lunde and Hake, 2009. Here, we provide a protocol for easy DNA extraction without phenol or chloroform. Therefore, this protocol is suitable for use in schools or laboratories that lack fume hoods.
[摘要] 玉米或玉米是主要的谷类作物和模式单子叶植物。 它的两个好处是易于授粉和易处理的遗传。 为了比较玉米和双子叶植物模型之间的发育，拟南芥参见Lunde和Hake，2005。关于该方案如何用于双突变体分析的例子参见Lunde和Hake，2009。 在这里，我们提供了一个简单的DNA提取方案，无需苯酚或氯仿。 因此，该协议适用于缺乏通风橱的学校或实验室。
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