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Date:
2015-06-20
[Abstract] Generating bacterial gene deletion mutants, also known as knockouts (KOs), is a powerful tool to investigate individual gene functions. However, fastidious bacteria such as Francisella tularensis (F. tularensis) often are difficult to genetically manipulate. Indeed, many different approaches have been tested to generate F. tularensis mutants. First, Tn5-based EZ::TN transposons have been successfully used to generate transposon libraries in F. tularensis (Qin and Mann, 2006; Weiss et al., 2007). However, creating a comprehensive transposon library with saturating mutations can be laborious, screening for gene disruption requires high-throughput assays where known phenotypes can be measured, and transposons may not completely inactivate the gene ...
[摘要] 产生细菌基因缺失突变体，也称为敲除（KO），是研究个别基因功能的有力工具。然而，诸如土拉弗朗西斯氏菌（emosa Francisella tularensis）（土拉弗朗西斯氏菌）之类的顽固细菌通常难以进行遗传操作。实际上，已经测试了许多不同的方法来生成F。 tularensi 的突变体。首先，基于Tn5的EZ :: TN转座子已经成功地用于在F中产生转座子文库。土耳其病（Qin and Mann，2006; Weiss等人，2007）。然而，创建具有饱和突变的综合转座子文库可能是费力的，筛选基因破坏需要高通量测定法，其中可以测量已知的表型，转座子可能不会完全失活目标基因或可能改变下游基因表达。第二，II组内含子（也称为Targetron）已用于灭活F。 （Rodriguez et al。，2008; Rodriguez et al。，2009）。 Targetron通过在质粒编码的RNA和染色体DNA之间形成复合物，随后将II组内含子插入感兴趣的基因而发挥功能。 Targetron的主要优点是它不需要抗生素抗性标记。然而，如转座子所指出的，targetron基因插入可能不能消除所有基因功能或可能影响下游基因表达。第三，同源重组可用于用选择性标记（例如抗生素抗性标记）完全替代染色体靶基因。这种经典的遗传技术已经在许多F中使用。土耳其语研究（Ramakrishnan等人，2008; ...
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