| Split Nano Luciferase-based Assay to Measure Assembly of Japanese Encephalitis Virus
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Cells infected with flavivirus release various forms of infectious and non-infectious particles as products and by-products. Comprehensive profiling of the released particles by density gradient centrifugation is informative for understanding viral particle assembly. However, it is difficult to detect low-abundance minor particles in such analyses. We developed a method for viral particle analysis that integrates a high-sensitivity split luciferase system and density gradient centrifugation. This protocol enables high-resolution profiling of particles produced by cells expressing Japanese encephalitis virus factors.
[摘要] [ 摘要] 黄病毒感染的细胞释放出各种形式的传染性和非传染性颗粒，分别作为产物和副产物。通过密度梯度离心对释放的颗粒进行全面分析，有助于理解病毒颗粒的组装，但是很难检测到低水平的病毒颗粒。我们开发了一种将高灵敏度分裂荧光素酶系统和密度梯度离心相结合的病毒颗粒分析方法，该协议可对表达日本脑炎病毒因子的细胞产生的颗粒进行高分辨率分析。
[ 背景 ] 黄病毒是包括病毒，登革热病毒，西尼罗河病毒，tick传脑炎病毒，寨卡病毒，黄热病病毒和日本脑炎病毒（JEV）在内的一组虫媒病毒，与人类的大量发病和死亡相关（ Chambers 等人，1990）。黄病毒具有编码长多肽的单个ORF基因组，该ORF基因组在翻译后被切割成三个结构性（C，prM 和E）和七个非结构性（NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A）。 ，NS4B和NS5）蛋白通过宿主信号肽酶和NS2B-NS3病毒蛋白酶（Chambers 等，1990）。
由NS5 RNA依赖的RNA聚合酶合成的病毒基因组RNA与C蛋白结合形成核衣壳，然后将其包装在由宿主细胞衍生的脂质膜，病毒prM 和E跨膜蛋白组成的包膜中以形成病毒体。已经发现，缺乏所有结构基因的还原型黄病毒基因组RNA被称为亚基因组复制子，可以在宿主细胞中自我复制（Suzuki ...
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| Purification of 70S Ribosomes from Bacillus subtilis
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Author:
Date:
2015-04-05
[Abstract] The eubacterial ribosome (70S) is a macromolecular complex that is composed of a small (30S) subunit and a large (50S) subunit. The small subunit comprises the 16S ribosomal RNA (rRNA) and more than 20 ribosomal proteins (r-proteins), whereas the large subunit comprises the 23S and 5S rRNAs and more than 30 r-proteins. Bacillus subtilis (B. subtilis) has 57 r-ribosomal protein genes and three rRNAs (16S, 23S and 5S rRNAs). Among them, we identified 21 r-proteins of the small subunit and 31 r-proteins of the large subunit in B. subtilis (Nanamiya et al., 2004). The functions and roles of individual components of the ribosome have not yet been completely clarified. Herein we describe in detail an ultracentrifugation-based protocol for the preparation of ...
[摘要] 真细菌核糖体（70S）是由小（30S）亚基和大（50S）亚基组成的大分子复合物。 小亚基包含16S核糖体RNA（rRNA）和超过20个核糖体蛋白（r-蛋白），而大亚基包含23S和5S rRNA和超过30个r蛋白。 枯草芽孢杆菌（<枯草芽孢杆菌）具有57个核糖体蛋白基因和三个rrna（16s，23s和5s rrna）。 其中，我们确定21 r蛋白的小亚基和31 r蛋白的大亚基在b。 枯草芽孢杆菌（nanamiya等人，2004）。 核糖体的各个组分的功能和作用尚未完全澄清。 在本文中，我们详细描述了从b的指数生长细胞制备70s核糖体的基于超速离心的方案。 枯草芽孢杆菌。
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| Purification of HCV-remodeled and Control ER Membranes
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Author:
Date:
2014-05-20
[Abstract] As for all positive strand RNA viruses, hepatitis C virus (HCV) RNA replication is tightly associated with rearranged host cell membranes, termed viral replication factories. However, up to now little is known about both viral and cellular constituents of viral replication factories. Here, we describe a protocol to specifically isolate HCV-remodeled host cell membranes and endoplasmic reticulum (ER) membranes of naïve cells, by using a functional NS4B HA-tagged subgenomic replicon and a C-terminally HA-tagged calnexin-overexpressing cell line, respectively. Post-nuclear whole cell membrane fractions are first enriched by density gradient centrifugation, followed by HA-specific affinity tag purification. Upon elution under native conditions, purified samples can be subject to a variety of ...
[摘要] 至于所有正链RNA病毒，丙型肝炎病毒（HCV）RNA复制与称为病毒复制工厂的重排宿主细胞膜紧密相关。 然而，到目前为止对病毒复制工厂的病毒和细胞成分了解甚少。 在这里，我们描述一个协议，通过使用功能NS4B HA标记亚基因组复制子和C末端HA标记calnexin过表达细胞系，特异性隔离HCV重塑的宿主细胞膜和内质网（ER）膜的幼稚细胞， 分别。 首先通过密度梯度离心富集核后全细胞膜级分，随后通过HA特异性亲和标签纯化。 在天然条件下洗脱时，纯化的样品可进行多种生物化学和功能测定。
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