| Real-time PCR Analysis of PAMP-induced Marker Gene Expression in Nicotiana benthamiana
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Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract] Perception of pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) often triggers various innate immune responses in plants. The transcriptional changes of defense-related genes are often used as a marker to assay PAMP-triggered plant immune response. Here we described a protocol to monitor the relative expression level of marker genes in Nicotiana benthamiana upon treatment with PAMPs. The procedure includes leaf treatment using PAMPs, total RNA isolation, cDNA synthesis, quantitative real-time PCR and data analysis. This protocol is applicable to monitor marker gene expression triggered by different PAMPs in N. benthamiana.
[摘要] 对病原体相关分子模式（PAMP）的感知经常引发植物中的各种先天免疫应答。 防御相关基因的转录变化通常用作测定PAMP触发的植物免疫应答的标记。 在这里，我们描述了一种方案，用于监测用PAMP处理的本塞姆氏烟草中的标记基因的相对表达水平。 该方法包括使用PAMP进行叶处理，总RNA分离，cDNA合成，定量实时PCR和数据分析。 该协议适用于监测 N中不同PAMP触发的标记基因表达。本塞姆氏。
【背景】病原体相关的分子模式，即PAMP，是一类源自病原体的分子，在微生物中相对保守。多个PAMP，如flg22和XEG1（Felix et al。，1999; Ma et al。，2015），已被表征，可通过植物细胞表面定位模式检测 - 识别受体（PRR），从而诱导PAMP引发的免疫（Couto和Zipfel，2016）。 PAMP触发的主要反应之一是与防御相关的制造者基因的激活（Navarro et al。，2004; Zipfel et al。，2006）。 Nicotiana benthamiana 已被广泛用作模型植物，并且对多种PAMP敏感。在 N.宾夕法尼亚，先前发现了标记基因，如 NbCYP71D20 ， NbACRE31 和 NbWRKY22 ，它们在PAMP处理后迅速活化（ Heese et al。，2007; Segonzac et ...
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| Pancreatic Acinar Cell 3-Dimensional Culture
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Author:
Date:
2013-10-05
[Abstract] Normal pancreatic acinar cells are difficult to maintain on traditional plastic culture surfaces due to their physical properties of housing large quantities of digestive enzymes and the formation of intercellular tight junctions and gap junctions (Apte and Wilson 2005; Rukstalis et al., 2003). However, placing primary acinar cells within a 3-dimensional matrix (3D-culture) maintains the cells for sufficient time so that they can be monitored for physiological changes to different stimuli. We have used a modified collagen 3D-culture system that has been adapted from Means et al. (2005) to model the very early events associated with pancreatic cancer development. In this model, KrasG12D-expressing pancreatic acinar cells, or wildtype acinar cells treated with ...
[摘要] 正常的胰腺腺泡细胞难以保持在传统的塑料培养表面上，因为其具有容纳大量消化酶和形成细胞间紧密连接和间隙连接的物理性质（Apte和Wilson 2005; Rukstalis等人， ，2003）。然而，将原代腺泡细胞放置在三维基质（3D培养）中保持细胞足够的时间，使得它们可以被监测对不同刺激的生理变化。我们已经使用改良的胶原三维培养系统，其已经从Means等人（2005）改编以模拟与胰腺癌发展相关的非常早期的事件。在该模型中，表达Kras G12D 的表达胰腺腺泡细胞或用EGFR依赖性生长因子（即，TGFα）处理的野生型腺泡细胞转化成导管囊肿，在胰腺上皮内瘤形成（PanIN）和胰腺导管腺癌（PDAC）形成之前的腺泡至导管化生（ADM）阶段（Means等人，2005; Shi等人，/em>，2013）。
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