| Methylation-sensitive Amplified Polymorphism as a Tool to Analyze Wild Potato Hybrids
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Author:
Date:
2020-07-05
[Abstract] Methylation-Sensitive Amplification Polymorphism (MSAP) is a versatile marker for analyzing DNA methylation patterns in non-model species. The implementation of this technique does not require a reference genome and makes it possible to determine the methylation status of hundreds of anonymous loci distributed throughout the genome. In addition, the inheritance of specific methylation patterns can be studied. Here, we present a protocol for analyzing DNA methylation patterns through MSAP markers in potato interspecific hybrids and their parental genotypes.
[摘要] [摘要]甲基化敏感扩增多态性(MSAP)是一种用于分析非模型物种DNA甲基化模式的多功能标记。这种技术的实施不需要参考基因组，并且可以确定分布在整个基因组中的数百个匿名位点的甲基化状态。此外，特定甲基化模式的遗传可以被研究。在这里，我们提出了通过MSAP标记分析马铃薯种间杂交种及其亲本基因型的DNA甲基化模式的协议。
[背景]核苷酸序列并不是基因组信息的唯一形式，DNA甲基化、组蛋白、修改DNA上的组蛋白和核苷酸残基的酶，甚至RNA，都会影响基因的活动，并为细胞提供另一层指令。DNA甲基化、组蛋白、修改组蛋白的酶和DNA上的核苷酸残基，甚至RNA，都会影响基因活动，并为细胞提供另一层指令。表观遗传学变化，也称为表观遗传，可以遗传，并具有重要的表型后果。在植物中，甲基化反应将胞嘧啶残基修饰成5-甲基胞嘧啶。这种表观遗传机制对于维持基因组的完整性是至关重要的，并有助于调节基因在发育过程中的表达以及对生物和非生物胁迫的反应。此外，DNA甲基化的变化是由杂交和多倍体化等基因组冲击引发的，这是植物进化过程中的两个重要现象（Cara et al., 2019)。
有各种不同的方法来研究DNA甲基化的变化。可以使用高效液相色谱法(HPLC)评估全局性的胞嘧啶甲基化，这种分析方法可以量化胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶，并计算基因组中甲基化残基的百分比。对于研究基因组上特定位置的DNA甲基化，可以提到两种选择。一种是使用对限制性位点胞嘧啶甲基化具有不同敏感性的异构体。例如，甲基化敏感扩增多态性(MSAP)标记表征来自随机基因组DNA的匿名5′-CCGG序列处的甲基化模式。这是对原始AFLP协议的改编(Voset ...
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| Fluorescence-based CAPS Multiplex Genotyping on Capillary Electrophoresis Systems
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Author:
Date:
2015-05-20
[Abstract] Recent advances in next-generation sequencing techniques allow the detection of a large number of SNPs and their use in a high throughput manner. However, Cleaved Amplified Polymorphic Sequences (CAPSs) still play a significant role as complement to other high throughput methods for SNP genotyping. Therefore, new methods focusing on the acceleration of this type of markers are highly desirable. The combination of the classical CAPS technique and a M13-tailed primer multiplexing assay was used to develop an agarose gel free protocol for the analysis of SNPs via restriction enzyme digestion. PCR products were fluorescence labeled with a universal M13 primer and subsequently digested with the appropriate restriction endonuclease. After mixing differently labeled products, they were detected ...
[摘要] 新一代测序技术的最新进展允许以高通量方式检测大量的SNP及其使用。然而，裂解扩增多态性序列（CAPS）仍然作为补充其他高通量方法为SNP基因分型发挥重要作用。因此，非常需要关注于加速这种类型的标记的新方法。使用经典CAPS技术和M13尾引物多重测定的组合开发用于通过限制酶消化分析SNP的无琼脂糖凝胶方案。 PCR产物用通用M13引物进行荧光标记，随后用适当的限制性内切酶消化。在混合不同标记的产物后，在毛细管电泳系统上检测它们。该方法允许在短时间内以整体低成本以多路复用的方式进行成本有效的几种SNP的基因分型。此外，该方法可以有效地与在同一电泳运行中同时检测SSR组合，导致非常适合于基于标记的选择程序，绘图群体的基因分型和遗传多样性测定的程序。
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| High-throughput Method for Determination of Seed Paternity by Microsatellite Markers
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Author:
Date:
2013-04-20
[Abstract] In this protocol, determination of seed paternity by microsatellite markers in Nicotiana attenuata is described. However, this does not include a protocol for the novel marker selection/identification, but rather exploits the markers generated for a closely related species N. tabacum (Bindler et al., 2007). This is a high-throughput protocol optimized and streamlined for one skilled person to process 384 (96 x 4) seeds in 5 days, from DNA isolation (from seedlings) to paternity assessment by microsatellite genotype data.
[摘要] 在该方案中，描述了通过微卫星标记在烟草中确定种子亲子。 然而，这不包括新标记选择/鉴定的方案，而是利用为密切相关物种N产生的标记。 tabacum （Bindler ，2007）。 这是一种高通量方案，对于技术人员来说，优化和流线化以在5天内从微生物分离（从幼苗）到通过微卫星基因型数据的亲子鉴定来处理384（96×4）种子。
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