| Primary Olfactory Ensheathing Cell Culture from Human Olfactory Mucosa Specimen
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] The human olfactory mucosa is located in the middle and superior turbinates, and the septum of nasal cavity. Olfactory mucosa plays an important role in detection of odours and it is also the only nervous tissue that is exposed to the external environment. This property leads to easy access to the olfactory mucosa for achieving various researches. The lamina propria of olfactory mucosa consists of olfactory ensheathing cells (OECs) that cover the nerve fibers of olfactory. Here we describe a protocol for isolation of OECs from biopsy of human olfactory mucosa.
[摘要] 人类嗅粘膜位于中鼻甲和鼻中隔，鼻腔隔膜。嗅粘膜在气味检测中起重要作用，也是暴露于外界环境的唯一神经组织。该属性可以方便地进入嗅粘膜进行各种研究。嗅粘膜固有层由覆盖嗅神经纤维的嗅鞘细胞（OEC）组成。在这里，我们描述了从人类嗅粘膜活检中分离OEC的方案。
背景 嗅鞘细胞（OECs）是神经胶质细胞，其表达与星形胶质细胞和施旺细胞类似的各种抗原，例如胶质纤维相关蛋白（GFAP），S100-β，p75低亲和力神经生长因子受体，波形蛋白，巢蛋白和神经肽Y （Singh等人，2013）。嗅鞘细胞释放在中枢神经系统的细胞生长和粘连中起作用的不同神经营养因子和粘附分子（Pastrana等人，2007）。此外，这些细胞在受损的中枢神经系统的再生中起重要作用，例如治疗脊髓损伤和神经变性疾病（Novikova等人，2011）。我们选择OEC作为我们研究中的研究材料，因为它们具有诸如高迁移能力，可及源，鼻嗅粘膜干细胞分化和非致瘤性行为等优势性质（Huang et al。 ，2008; Escada 等人，2009）。该方案描述了从人类嗅觉粘膜样品中分离OEC的一步一步的过程。
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| Preparation of Primary Astrocyte Culture Derived from Human Glioblastoma Multiforme Specimen
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Glioblastoma multiforme (GBM) is a grade 4 astrocytoma tumor in central nervous system. Astrocytes can be isolated from human GBM. Study of astrocytes can provide insights about the formation, progression and recurrence of glioblastoma. For using isolated astrocytes, new studies can be designed in the fields of pharmacology, neuroscience and neurosurgery for glioblastoma treatment. This protocol describes the details for preparing high purity primary astrocytes from human GBM. Tumor tissue is disrupted using mechanical dissociation and chemical digestion in this protocol. 2 weeks after plating the cell suspension in culture, primary astrocytes are available for further subculturing and immunocytochemistry of S100-beta antigen.
[摘要] 多形性葡萄球菌（GBM）是中枢神经系统中的4级星形细胞瘤。星形胶质细胞可以从人类GBM中分离出来。研究星形胶质细胞可以提供关于胶质母细胞瘤的形成，进展和复发的见解。对于使用孤立的星形胶质细胞，可以在药理学，神经科学和神经外科学领域设计新的研究用于成胶质细胞瘤治疗。该方案描述了从人类GBM制备高纯度原发性星形胶质细胞的细节。在本方案中使用机械解离和化学消化破坏肿瘤组织。培养细胞悬液2周后，初级星形胶质细胞可用于S100-β抗原的进一步传代培养和免疫细胞化学。
星形胶质细胞是提供脑神经元结构和营养支持的神经胶质细胞。星形胶质细胞的细胞周期似乎在星形细胞瘤脑肿瘤中被破坏。世界卫生组织根据恶性肿瘤将星形细胞分为四级。多形性成胶质细胞瘤（GBM，IV级）是星形细胞瘤最恶性的形式。成胶质细胞瘤的特征在于具有快速增殖速率和血管生成的侵袭性细胞。胶质母细胞瘤患者预后差。目前的治疗方法，包括手术，化学治疗和放射治疗对患者的治疗没有很好的疗效。患者的中位生存时间大约在治疗后一年（Stuup等人，2005; Wen和Kesari，2008）。许多研究人员专注于评估胶质母细胞瘤细胞的生理功能和凋亡的研究，以便检测更有效的治疗方法。在这里，我们提出了一种从没有成纤维细胞污染的人胶质母细胞瘤标本中分离高纯度原代星形胶质细胞的方法（Hashemi等人，2016）。
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| Separation of Free and Bound cAMP in Mycobacteria
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Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract] Mycobacterial genomes encode a plethora of genes that are involved in the synthesis, utilization and degradation of cAMP. The genome of M. tuberculosis H37Rv, for example, encodes 16 adenylyl cyclases and 10 genes harbouring the cyclic nucleotide-binding (CNB) domain (Shenoy and Visweswariah, 2006). Cyclic AMP is efficiently secreted by mycobacteria, and cytosolic as well as extracellular levels of cAMP can reach hundreds of micromolar. We have recently reported that an abundantly expressed universal stress protein (USP; Rv1636 in M. tuberculosis H37Rv and MSMEG_3811 in M. smegmatis, respectively) binds cAMP (Banerjee et al., 2015). Given the number of cAMP-binding proteins present in mycobacteria, it is expected that a significant fraction of ...
[摘要] 分枝杆菌基因组编码涉及cAMP的合成，利用和降解的大量基因。例如，结核分枝杆菌H37Rv的基因组编码16个腺苷酸环化酶和10个携带环核苷酸结合（CNB）结构域的基因（Shenoy和Visweswariah，2006）。循环AMP由分枝杆菌有效分泌，细胞溶质以及细胞外cAMP水平可达数百微摩尔。我们最近报道，大量表达的普遍应激蛋白（USP; Rv1636在结核分枝杆菌H37Rv和MSMEG_3811分别在耻垢分枝杆菌中）分别结合cAMP（Banerjee等，2015）。鉴于存在于分枝杆菌中的cAMP结合蛋白的数量，预期细胞内cAMP的显着部分可能与蛋白质结合。通常用于测量cAMP的方法是放射免疫测定（RIA）和ELISA。然而，这些方法包括将cAMP“结合”解离成蛋白质的样品的预先酸化，因此代表样品中存在的“总”cAMP。在本协议中，我们描述了一种将cAMP'结合'蛋白质与蛋白质“自由”分离或与蛋白质不相关的方法。这通过使细胞溶质级分或培养物上清液通过具有3kDa截止值的膜过滤来进行。只有'自由'cAMP才能通过膜。因此，滤液中的cAMP浓度代表样品中的“游离”cAMP。原始细胞溶质级分或培养上清液中的环AMP水平代表“总”cAMP浓度。从“总”中减去“自由”提供了与蛋白质结合的cAMP量。
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