| Muscle Histology Characterization Using H&E Staining and Muscle Fiber Type Classification Using Immunofluorescence Staining
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Muscle function is determined by its structure and fiber type composition. Here we describe a protocol to examine muscle histology and myofiber types using hematoxylin and eosin (H&E) and immunofluorescence staining, respectively. H&E stain nucleus in blue and cytoplasm in red, therefore allowing for morphological analyses, such as myofiber diameter, the presence of degenerated and regenerated myofibers, and adipocytes and fibrotic cells. Muscle fibers in adult skeletal muscles of rodents are classified into 4 subtypes based on the expression of myosin heavy chain proteins: Myh7 (type I fiber), Myh2 (type IIA fiber), Myh1 (type IIX fiber), Myh4 (type IIB fiber). A panel of monoclonal antibodies can be used to specifically label these muscle fiber subtypes. These protocols are commonly ...
[摘要] 肌肉功能由其结构和纤维类型组成决定。 这里我们描述一个协议，分别检查使用苏木精和伊红（H＆E）和免疫荧光染色的肌肉组织学和肌纤维类型。 H＆E在蓝色和细胞质红色染色核，因此允许形态学分析，如肌纤维直径，退化和再生肌纤维的存在，以及脂肪细胞和纤维化细胞。 基于肌球蛋白重链蛋白Myh7（I型纤维），Myh2（IIA型纤维），Myh1（IIX型纤维），Myh4（IIB型纤维）的表达，将啮齿动物成年骨骼肌肌肉纤维分为4种亚型：。 一组单克隆抗体可用于特异性标记这些肌纤维亚型。 这些方案通常用于肌肉发育，生长和再生的研究（例如：Wang等，2015; Nie等，2016; Yue et al。，2016; Wang et al。，2017）。
【背景】骨骼肌由肌细胞，脂肪细胞，成纤维细胞和其他细胞类型组成。 多核心肌细胞，骨骼肌的主要组成，也称为肌纤维（肌纤维）。 肌肉组织学研究是肌肉功能研究的常规方法。 一般来说，肌纤维的直径和脂肪细胞的程度和纤维化面积与肌肉力量有关（Yue et al。，2016）。 此外，中心有核肌纤维的存在作为肌肉再生期间新再生肌纤维的替代指标（Wang等，2017）。 基于差异代谢性状和肌球蛋白重链（MyHC）亚型的表达，肌纤维分为四种类型（I，IIa，IIx和IIb）。 ...
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| Lung Section Staining and Microscopy
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Our protocol describes immunofluorescent staining, hematoxylin and eosin staining and Masson’s trichrome staining on lung sections.
[摘要] 我们的方案描述了免疫荧光染色，苏木精和伊红染色以及Masson在肺切片上的三色染色。
背景 肺的主要功能是气体交换。肺由各种专门的细胞和组织组成，包括支气管，细支气管和肺泡，以促进气体交换。为了研究小鼠模型中的肺发育或肺部疾病，可以从小鼠中去除肺，并将其冷冻并嵌入最佳切割温度（OCT）化合物或化学保藏并包埋在石蜡中。为了保持肺组织结构，我们用1ml OCT化合物填充肺，用于制备冷冻切片，或用于石蜡切片的10％缓冲福尔马林（Zhou等人，2016）。然后将肺切片从冷冻或石蜡包埋的肺切片并安装到载玻片上用于制备染色。我们使用冷冻组织切片进行基于抗体的免疫荧光染色，并使用石蜡包埋切片进行苏木精和伊红（H＆E）染色或Masson三色染色。冷冻切片更快地准备免疫荧光染色，大多数抗体在冷冻切片上工作良好。石蜡切片也可用于免疫荧光染色，但需要脱蜡，补液和抗原检索。即使在抗原检索后，一些抗体在石蜡切片上也不能很好地工作。然而，石蜡样品可以在室温下储存很长时间，并且可以容易地切成非常薄的部分。石蜡切片保留比冷冻切片更好的组织形态，因此它们对于H＆E或三色染色更好。
＆NBSP;免疫荧光染色是一种使用荧光团观察特异性结合其靶蛋白的抗体位置的免疫组织化学。 ...
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| Analysis of the Virulence of Uropathogenic Escherichia coli Strain CFT073 in the Murine Urinary Tract
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Author:
Date:
2017-02-05
[Abstract] This urinary tract infection model was used to monitor the efficacy of a new virulence factor of the uropathogenic Escherichia coli strain CFT073 in vivo. The new virulence factor which we designated TIR-containing protein C (TcpC) blocks Toll-like receptor signaling and the NLRP3 inflammasome signaling cascade by interacting with key components of both pattern recognition receptor systems (Cirl et al., 2008; Waldhuber et al., 2016). We infected wild type and knock-out mice with wildtype CFT073 and a mutant CFT073 strain lacking tcpC. This protocol describes how the mice were infected, how CFT073 was prepared and how the infection was monitored. The protocol was derived from our previously published work and allowed us to demonstrate that TcpC ...
[摘要] 该尿路感染模型被用于监测新生的致病性大肠杆菌菌株CFT073在体内的功效。我们指定含TIR的蛋白C（TcpC）的新的毒力因子通过与模式识别受体系统的关键组分相互作用来阻断Toll样受体信号传导和NLRP3炎性信号级联反应（Cirl等人）。 ，2008; Waldhuber等人，2016）。我们用野生型CFT073和缺乏tcpC的突变体CFT073菌株感染野生型和敲除小鼠。该协议描述了小鼠如何感染，如何制备CFT073以及如何监测感染。该方案源于我们以前发表的工作，并允许我们证明TcpC是一种强大的毒力因子，通过增加CFT073在尿液和肾脏中的细菌负担。此外，TcpC负责肾脓肿的发展，因为感染具有野生型但不是tcpC的缺乏CFT073突变体的小鼠引起这种并发症。
背景 尿路感染（UTIs）是全世界最常见的细菌感染（Dielubanza和Schaeffer，2011），主要是由欧洲病原大肠杆菌（UPEC）引起的（Zhang和Foxman，2003）。复发性感染率高（Dielubanza和Schaeffer，2011），抗生素抗性E的出现也有所增加。大肠杆菌菌株（Eurosurveillance editorial，2015）。因此，为了开发新的治疗剂，对宿主和细菌因子对尿路感染病理生理学的了解具有很高的相关性。
＆nbsp;鼠类UTI模型系统是主要使用的动物模型系统，用于研究UPEC分离株和细菌 ...
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