| Obtaining Multi-electrode Array Recordings from Human Induced Pluripotent Stem Cell–Derived Neurons
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Neuronal electrical properties are often aberrant in neurological disorders. Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)-derived neurons represent a useful platform for neurological disease modeling, drug discovery and toxicity screening in vitro. Multi-electrode array (MEA) systems offer a non-invasive and label-free platform to record neuronal evoked-responses concurrently from multiple electrodes. To better detect the neural network changes, we used the Axion Maestro MEA platform to assess neuronal activity and bursting behaviors in hiPSC-derived neuronal cultures. Here we describe the detailed protocol for neuronal culture preparation, MEA recording, and data analysis, which we hope will benefit other researchers in the field.
[摘要] 神经元电特性在神经疾病中经常是异常的。 人诱导的多能干细胞（hiPSC）衍生的神经元代表神经疾病建模，药物发现和体外毒性筛选的有用平台。 多电极阵列（MEA）系统提供了一个非侵入性的无标记平台，可同时记录来自多个电极的神经元诱发反应。 为了更好地检测神经网络变化，我们使用了Axion Maestro MEA平台来评估hiPSC衍生的神经元培养物中的神经元活动和爆裂行为。 在这里，我们描述了神经元培养准备，MEA记录和数据分析的详细方案，我们希望这将有益于该领域的其他研究人员。
【背景】人类诱导多能干细胞（hiPSC）技术目前正用于体外模拟神经和精神疾病。最近的研究已经证明，与特定疾病有关的某些细胞表型可以在盘中重现。神经电活动是神经系统功能的本质，代表了正常功能对于情绪，记忆，感觉形态和体内行为至关重要的交流的关键形式。在疾病状况下，电特性可能受到影响，因此了解基于hiPSC的神经疾病模型中的神经元电路连接性，生理学和病理学非常重要。
膜片钳和多电极阵列（MEA）技术是用于评估电生理学活性并由此评估神经元功能的主要技术。尽管膜片钳是研究单个细胞的活性和功能的强大的细胞内方法（Neher等人，1978），MEA平板具有记录细胞外动作电位（或尖峰）的能力，和同一板中数千个不同细胞同时的局部场电位，从而更好地理解网络水平的神经元活动（Hutzler等人，2006; ...
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| In vivo Priming of T Cells with in vitro Pulsed Dendritic Cells: Popliteal Lymph Node Assay
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] One-way mixed lymphocyte reaction (MLR) is a classic tool to measure how T cells react to external stimuli. However, MLR is an in vitro reaction system, which shows different response intensity compared with in vivo trails sometimes due to the lack of cytokines, tissue matrix and other immune response associated factors. The following popliteal lymph node assay (PLNA) protocol is designed to test the T cells antigen-specific reaction in vivo by using ovalbumin (OVA) specific reacted transgenic mouse OT-1 and OT-2.
[摘要] 单向混合淋巴细胞反应（MLR）是测量T细胞如何与外部刺激反应的经典工具。 然而，MLR是体外反应系统，其与体内踪迹相比显示出不同的反应强度，有时由于缺乏细胞因子，组织基质和其他免疫应答相关因素。 设计了以下po淋巴结测定（PLNA）方案，通过使用卵白蛋白（OVA）特异性反应的转基因小鼠OT-1和OT-2，体内测试T细胞抗原特异性反应。
【背景】在移植中，自身免疫和感染研究中，单向混合淋巴细胞反应（MLR）是评估T细胞增殖在抗原存在细胞（APC）或其他外部刺激反应中是否增加或抑制的有用参数。 这是一个典型的功能测试，它展示了T细胞如何受到免疫抑制药物（Hou et al。，2015; Zhang et al。，2015），阴性细胞或外来体疫苗（Ma）的测试试剂的影响 et al。，2016; Cai et al。，2017）。
然而，由于体外免疫反应系统，该系统具有一定的限制。 体内免疫反应受生物微环境的影响，如细胞因子，趋化因子，激素分泌，组织基质等未知生物因子。
在这里，po淋巴结测定（PLNA）被设计为体内工具，通过使用卵白蛋白（OVA）抗原特异性反应系统来测试增加或减少的免疫应答（Bhatt等，2014; Cai et al。，2017）。
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| Mouse Corneal Stroma Fibroblast Primary Cell Culture
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Author:
Date:
2016-10-05
[Abstract] This protocol is developed for primary cell culture of cornea stromal keratocytes isolated from neonatal mouse eyeballs. It provides an optimal condition to isolate stromal keratocytes which maintain high viability for cell culture.
[摘要] 该协议是为从新生小鼠眼球分离的角膜基质角膜细胞的原代细胞培养而开发的。 它提供了一个最佳条件，以隔离基质角膜细胞，保持细胞培养的高生存力。
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