| In vitro Homeostatic Proliferation of Human CD8 T Cells
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Long-lived T-cell–mediated immunity requires persistence of memory T cells in an antigen-free environment while also maintaining a heightened capacity to recall effector functions. Such antigen-independent homeostatic proliferation is mediated in part by the common gamma-chain cytokines IL-7 and IL-15. To further explore the mechanisms governing maintenance of effector functions in long-lived memory T cells during antigen-independent proliferation, human naïve and memory CD8 T cells can be sorted from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), labeled with the proliferation-tracking dye carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE), and then purified based on their levels of cell division. This allows investigators to assess differences in the desired molecular target in cells that have ...
[摘要] 长寿T细胞介导的免疫需要在无抗原环境中持续存在记忆T细胞，同时还保持提高的回忆效应器功能的能力。这种不依赖于抗原的体内平衡增殖部分由常见的γ链细胞因子IL-7和IL-15介导。为了进一步探索在抗原非依赖性增殖过程中维持长效记忆T细胞中效应子功能的机制，可以从外周血单核细胞（PBMCs）中分选人幼稚和记忆CD8T细胞，用增殖跟踪染料羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（CFSE），然后根据它们的细胞分裂水平进行纯化。这使得研究人员能够评估经历细胞因子驱动的增殖的细胞中期望的分子靶点的差异。我们在这里提供了一个协议，用于评估在分裂和未分裂的人类幼稚和记忆CD8 T细胞中的表观遗传程序，在用IL-7和IL-15培养7天之后，以说明这种方法如何阐明控制在长寿记忆CD8T细胞的稳态期间保持效应子功能。
【背景】获得性免疫的一个主要特征是对先前遇到的病原体的免疫记忆的发展（Plotkin等人，2013）。记忆CD8 T细胞在为宿主以前遇到的病原体提供终生保护方面发挥重要作用，但为了提供长寿命的保护，T细胞必须已经获得了在无抗原中持续并保持效应功能的能力环境。在此期间，记忆T细胞响应于IL-7/15细胞因子进行抗原非依赖性增殖，尽管程度不同。
记忆CD8 T细胞的总池是几种不同的细胞亚群的异质组合，其对稳态细胞因子的反应不同。例如，CD8 ...
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| Efficient Isolation of Influenza Specific CTLs
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Author:
Date:
2016-06-20
[Abstract] Human antigen-specific CD8+ T-cell clones are valuable tools for dissecting CD8+ T-cell responses against antigens derived from infectious agents, cancer and self antigens. Here we describe a protocol for isolating human antigen-specific CD8+ T cells. This protocol uses surface capture of IFNγ to identify antigen responsive cells that are then cloned by single-cell sorting. Here we use CD8+ T-cell responses to influenza matrix protein (MP) as an example, but this approach can be applied to any antigen specificity.
[摘要] 人抗原特异性CD8 + T细胞克隆是用于解剖来自感染剂，癌症和自身抗原的抗原的CD8 + T细胞应答的有价值的工具。 在这里我们描述了用于分离人抗原特异性CD8 + T细胞的方案。 该协议使用IFNγ的表面捕获来鉴定抗原反应性细胞，然后通过单细胞分选克隆。 这里我们使用CD8 + T细胞对流感基质蛋白（MP）的反应作为例子，但这种方法可以应用于任何抗原特异性。
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