| A Lentiviral Pseudotype ELLA for the Measurement of Antibodies Against Influenza Neuraminidase
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] This protocol describes the rapid and safe production of lentiviral pseudotypes characterized by a lentiviral core containing a reporter, in conjunction with avian influenza haemagglutinin (HA) and human neuraminidase (NA) glycoproteins on the surface. Production is optimized with Endofectin LentiTM transfection reagent in 6-well plate format. These pseudotyped viruses can be employed for serological assays of surface glycoproteins HA and NA. They can be efficiently used to perform the ELLA (Enzyme-linked lectin assay) to measure NA inhibiting antibodies in lieu of using reassortant virus or Triton X-100 inactivated wild-type virus as source of antigen, which may require higher biosafety levels.
[摘要] 该方案描述了慢病毒假型的快速和安全生产，其特征在于含有报道分子的慢病毒核心，以及表面上的禽流感血凝素（HA）和人神经氨酸酶（NA）糖蛋白。 使用6孔板形式的Endofectin Lenti TM 转染试剂优化生产。 这些假型病毒可用于表面糖蛋白HA和NA的血清学测定。 它们可以有效地用于进行ELLA（酶联凝集素测定）以测量NA抑制抗体，而不是使用重配病毒或Triton X-100灭活的野生型病毒作为抗原来源，这可能需要更高的生物安全水平。
【背景】流感病毒假型的产生先前已被广泛描述（Nefkens et al。，2007; Temperton et al。，2007; Carnell et al。，2015）。需要一种安全快速的系统来评估通过ELLA测定靶向NA的抗体，避免使用重配错配病毒或野生型病毒，这已经通过产生携带NA型流感假型来满足（Prevato et al。，2015）。最近的一项研究（Biuso et al。，2017）证实HA与NA的共表达改善了新形成的假型慢病毒的释放。在这里，我们报告了一种简单，广泛适用和优化的PV生产方案，使用6孔板格式的Endofectin Lenti TM ...
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| In vitro Tumor Cell Migration Assay Using ThinCertsTM (Transwells)
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Author:
Date:
2016-06-05
[Abstract] The high migration rate of tumor cells often results in poor prognosis for the survival of the patients. Here, we describe a protocol to measure the migration of cells using a quantitative assay. The relative tumor cell migration was measured using ThinCertsTM cell culture inserts and a lactate dehydrogenase (LDH) assay to quantify the relative cell number. The quantification of the migration with the LDH kit is much more precise than other methods using i.e. crystal blue to count the cells.
[摘要] 肿瘤细胞的高迁移率通常导致患者的生存的不良预后。 在这里，我们描述了使用定量测定测量细胞迁移的协议。 使用ThinCerts TM细胞培养插入物和乳酸脱氢酶（LDH）测定来测量相对肿瘤细胞迁移以定量相对细胞数。 使用LDH试剂盒的迁移的定量比使用结晶蓝计数细胞的其它方法精确得多。
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