| Optimized Immunostaining of Embryonic and Early Postnatal Mouse Brain Sections
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] The mammalian neocortex, the outer layer of the cerebrum and most recently evolved brain region, is characterized by its unique areal and laminar organization. Distinct cortical layers and areas can be identified by the protein expression of graded transcription factors and molecular determinants that define the identity of different projection neurons. Thus, specific detection and visualization of protein expression is crucial for assessing the identity of neocortical neurons and, more broadly, for understanding early and late developmental mechanisms and function of this complex system. Several immunostaining/immunofluorescence methods exist to detect protein expression. Published protocols vary with regard to subtle details, which may impact the final outcome of the immunofluorescence. ...
[摘要] [摘要]哺乳动物的新皮层是大脑的外层，也是最近进化的大脑区域，其特征在于其独特的区域和层状组织。不同的皮质层和区域可以通过分级转录因子的蛋白质表达和定义不同投射神经元身份的分子决定簇来鉴定。因此，蛋白质表达的特异性检测和可视化对于评估新皮层神经元的身份至关重要，更广泛地来说，对于理解这个复杂系统的早期和晚期发育机制和功能至关重要。一些 存在免疫染色/免疫荧光方法来检测蛋白质表达。已发布的方案在细节方面有所不同，可能会影响免疫荧光的最终结果。在这里，我们提供了详细的协议，适用于低温恒温器薄切片和厚振动切片器薄切片，该协议已成功地开发了针对新皮质发育关键分子的抗体。从早期的技术措施测距的大脑采集到的图像分析和统计，我们包括有关样品包容和每一个细节部分ING，幻灯片存储和旨在减少非特异性背景最佳抗体稀释。在实验室中常规使用的，我们的背景优化的免疫染色协议允许区域的有效检测-和层-独特新皮层投射神经元的特定的分子决定因素。
图形摘要：
优化的小鼠脑切片免疫染色方案的工作流程图。一。一个流程图的不同步骤的优化免疫染色协议薄低温恒温器和厚振动切片。乙。例如，用于在薄冠状免疫染色对SATB2和CTIP2部（20 μ ...
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| Bioluminescence Monitoring of Neuronal Activity in Freely Moving Zebrafish Larvae
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Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] The proof of concept for bioluminescence monitoring of neural activity in zebrafish with the genetically encoded calcium indicator GFP-aequorin has been previously described (Naumann et al., 2010) but challenges remain. First, bioluminescence signals originating from a single muscle fiber can constitute a major pitfall. Second, bioluminescence signals emanating from neurons only are very small. To improve signals while verifying specificity, we provide an optimized 4 steps protocol achieving: 1) selective expression of a zebrafish codon-optimized GFP-aequorin, 2) efficient soaking of larvae in GFP-aequorin substrate coelenterazine, 3) bioluminescence monitoring of neural activity from motor neurons in free-tailed moving animals performing acoustic ...
[摘要] 以前已经描述了基因编码的钙指示剂GFP-aequorin的斑马鱼中神经活性的生物发光监测的概念验证（Naumann等人，2010），但是仍然存在挑战。 首先，源自单一肌纤维的生物发光信号可能构成主要缺陷。 第二，仅从神经元发出的生物发光信号非常小。 为了改善信号，同时验证特异性，我们提供了一个优化的4步骤协议，实现：1）选择性表达斑马鱼密码子优化的GFP水母发光蛋白，2）在GFP-水母发光蛋白底物coelenterazine中有效浸泡幼虫3）生物发光监测神经活动 来自运动神经元的自由运动的动物执行声学逃逸和4）使用免疫组织化学验证肌肉的表达缺乏。
【背景】不同于荧光基因编码的钙指示剂（GECIs）（Grienberger和Konnerth，2012），如GCaMP家族，生物发光指示剂GFP-水母发光蛋白（Shimomura等，1962）不需要光激发，因此开启了监测神经元的新途径包括苍蝇在内的动物（Martin等，2007），小鼠（Rogers et al。，2007）和斑马鱼幼虫（Naumann et ...
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| Preparation and Immunofluorescence Staining of the Trachea in Drosophila Larvae and Pupae
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Author:
Date:
2016-05-05
[Abstract] The Drosophila melanogaster trachea is a branched network of rigid chitin-lined tubes that ramify throughout the body and functions as the fly’s respiratory organ. Small openings at the ends of the tracheal tubes allow gas exchange to occur by diffusion between internal tissues and the exterior environment. Tracheal tubes are lined by a single layer of epithelial cells, which secrete chitin and control tube morphology and size. Studies of tracheal development in Drosophila embryos have elucidated fundamental mechanisms of tube morphogenesis and maintenance in vivo, and identified major signaling pathways that regulate these processes (Manning and Krasnow, 1993; Affolter and Shilo, 2000; Zuo et al., 2013; Kerman et al., ...
[摘要] melanogaster 气管是一种由几丁质内衬的管组成的分支网络，分布在整个身体并作为苍蝇的呼吸器官。气管管端部的小开口允许通过内部组织和外部环境之间的扩散而发生气体交换。气管管由单层上皮细胞衬里，其分泌几丁质和对照管形态和尺寸。在Drosop hila 胚胎中的气管发育的研究阐明了管形态发生和维持体内的基本机制，并且鉴定了调节这些过程的主要信号传导途径（Manning和Krasnow，1993; Affolter和Shilo，2000; Zuo等人，2013; Kerman等人，2006; Schottenfeld等人， em，2010）。近年来，在变态过程中对气管的兴趣日益增长，当在幼虫中用作呼吸器官的气管分支被修复或被由致动的气管祖细胞产生的新的气管组织或成熟的气管细胞（Manning和Krasnow，1993; Sato和Kornberg，2002; Guha等人，2008; Guha和Kornberg，2005; Weaver和Krasnow，2008; Pitsouli和Perrimon， 2010; Chen和Krasnow，2014）在过程结束时形成成人气管。正在进行的衰变和组织形成模拟其他生物体中组织修复和再生的方面，并且已经用于理解祖细胞如何分裂和分化（Pitsouli和Perrimon，2010; ...
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