| Real-time in vivo Imaging of LPS-induced Local Inflammation and Drug Deposition in NF-κB Reporter Mice
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] Wound, biomaterial, and surgical infections are all characterized by a localized and excessive inflammation, motivating the development of in vivo methods focused on the analysis of local immune events. However, current inflammation models, such as the commonly used in vivo models of endotoxin-induced inflammation are based on systemic, usually intraperitoneal, administration of lipopolysaccharide (LPS), causing endotoxin shock. Here, we describe a model of LPS-induced local inflammation in NF-κB-RE-Luc reporter mice. LPS, alone or with added therapeutic substances, is delivered locally via a hydrogel which is deposited subcutaneously, providing a spatially defined environment, enabling in vivo bioimaging analyses of local NF-κB activation. Evaluation of drug ...
[摘要] [摘要 ] 伤口，生物材料和外科手术感染均以局部和过度炎症为特征，从而推动了专注于分析局部免疫事件的体内方法的发展。然而，当前的炎症模型，例如内毒素诱导的炎症的常用体内模型，是基于系统性的，通常是腹膜内注射脂多糖（LPS），引起内毒素休克。在这里，我们描述了LPS诱导局部炎症的模型NF- κ 乙-RE-Luc报告小鼠。LPS单独或与其他治疗物质一起通过水凝胶局部递送， 沉积皮下，提供一个空间限定的环境中，使得能够在体内生物成像本地NF-的分析κ 乙活化。可以在同一只小鼠中纵向分析药物功效的评估，并且使用荧光标记的药物，可以同时分析局部药物沉积，并将其与炎症部位相关联。最后，该方案还可以用于研究药物从局部沉积的凝胶和其他生物材料的保留和系统释放。
[背景 ] 局部过度的TLR应答的原因，有时不相称的炎症，如在不同类型的伤口和生物材料感染的观察。这些伤口并发症延迟了正常的愈合，并增加了严重感染和败血症的风险。考虑到后者，已经开发了败血症和内毒素休克的几种实验模型，其研究了系统性炎症的发展（Lewis 等，2016）。然而，需要从机械学和治疗学角度解决局部炎症事件的模型。甲转录ctivation 因子NF- κ 乙是各种炎性病症的关键组成部分，因此，NF- κ 乙被认为是重要的治疗靶标（刘等人，2017） 。实时的，纵向体内NF-的成像κ 乙活化NF κ ...
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| In vivo Analysis of Neutrophil Infiltration during LPS-induced Peritonitis
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Author:
Date:
2016-10-05
[Abstract] Bacterial lipopolysaccharide (LPS) is present in the outer membrane of Gram-negative bacteria and functions as pathogen-associated molecular pattern (PAMP) (Whitfield and Trent, 2014). LPS therefore is a potent activator of inflammatory responses leading to cytokine release and neutrophils recruitment. The lipid A moiety of LPS activates the complex consisting of the LPS binding protein (LBP), CD14, MD-2 and Toll-like receptor 4 (TLR4) and the non-canonical inflammasome-linked caspases-4, 5 and 11, which in turn activate the canonical NLRP3 inflammasome (Shi et al., 2014; Hagar et al., 2013; Kayagaki et al., 2013; Hoshino et al., 1999; Poltorak, 1998; Nagai et al., 2002; Park et al., 2009; Ratsimandresy et al., 2013). In ...
[摘要] 细菌脂多糖（LPS）存在于革兰氏阴性细菌的外膜中，并且作为病原体相关分子模式（PAMP）（Whitfield和Trent，2014）。因此LPS是炎症反应的有效活化剂，导致细胞因子释放和嗜中性粒细胞募集。 LPS的脂质A部分激活由LPS结合蛋白（LBP），CD14，MD-2和Toll样受体4（TLR4）组成的复合物和非规范的炎症小体连接的半胱天冬酶-4,5和11反过来激活典型的NLRP3炎症小体（Shi等人，2014; Hagar等人，2013; Kayagaki等人，2013; Hoshino等人，1999; Poltorak，1998; Nagai等人，2002; Park等人，2009; Ratsimandresy等人， et al 。，2013）。特别地，响应于炎症小体激活产生的细胞因子白细胞介素（IL）-1β在通过促进嗜中性粒细胞粘附和迁移的中性粒细胞募集中具有关键作用（McDonald等人，2010）。该方案允许研究的由LPS诱导的炎症反应，其通过跟踪体内髓过氧化物酶（MPO）活性来影响嗜中性粒细胞浸润（de Almeida等人，2015）。
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| In vivo Bioluminescence Imaging of Luciferase-labeled Cancer Cells
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Author:
Date:
2016-03-20
[Abstract] Over the past decade, in vivo bioluminescent imaging has emerged as a non-invasive and sensitive tool for studying ongoing biological processes within living organisms (Contag et al., 1997; Contag et al., 1998). Based on the detection and quantitation of the photons produced by the oxidation of luciferin by luciferase enzymes (Harvey, 1927), this technique has proved to be particularly useful in analyzing cancerous cells and monitoring tumor growth (Edinger et al., 1999; Sweeney et al., 1999; Vidal et al., 2015), providing a cost-effective insight into how the disease progresses in vivo, without the need of serial sacrifice of animals. This protocol describes in detail the procedure of obtaining luciferase-tagged tumors in ...
[摘要] 在过去十年中，体内生物发光成像已经成为用于研究活生物体内正在进行的生物过程的非侵入性和敏感性工具（Contag等人，1997; Contag et al。，1998）。 基于通过荧光素酶氧化荧光素产生的光子的检测和定量（Harvey，1927），该技术已经证明在分析癌细胞和监测肿瘤生长中特别有用（Edinger等， ，1999; Sweeney等人，1999; Vidal等人，2015），提供了关于疾病在体内如何进展的成本效益的洞察 ，无需连续牺牲动物。 该协议详细描述了在免疫受损的小鼠中获得荧光素酶标记的肿瘤的程序，其可以通过使用IVIS光谱成像仪通过生物发光成像进行研究。
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