| AIMTOR, a BRET Biosensor for Live Recording of mTOR Activity in Cell Populations and Single Cells
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Author:
Date:
2021-04-20
[Abstract] Mammalian target of rapamycin (mTOR) controls many crucial cellular functions, including protein synthesis, cell size, energy metabolism, lysosome and mitochondria biogenesis, and autophagy. Consequently, deregulation of mTOR signaling plays a role in numerous pathological conditions such as cancer, metabolic disorders and neurological diseases. Developing new tools to monitor mTOR spatiotemporal activation is crucial to better understand its roles in physiological and pathological conditions. However, the most widely used method to report mTOR activity relies on the quantification of specific mTOR-phosphorylated substrates by western blot. This approach requires cellular lysate preparation, which restricts the quantification to a single time point. Here, we present a simple protocol to ...
[摘要]
[摘要]雷帕霉素（mTOR的）控制许多重要的细胞功能的哺乳动物靶，包括蛋白合成，细胞大小，能量代谢，溶酶体和线粒体生物发生，和自体吞噬。因此，mTOR信号转导的失调在许多病理状况如癌症，代谢紊乱和神经系统疾病中起作用。开发新的工具来监控mTOR的时空激活关键的是要更好地了解它的作用小号在生理和病理条件。但是，最广泛使用的报告mTOR活性的方法取决于对特定mTOR的定量- 磷酸化底物由瓦特西部时代b很多。这种方法需要细胞裂解物的制备，这限制了量化到一个单一的时间点。在这里，我们提出了一个简单的协议来研究mTOR的在活细胞的活性在实时使用AIMTOR，一个分子内BRET基（b ioluminescence ř esonance Ë NERGY吨转让（BOT））的生物传感器，我们最近设计（Bouquier等人，2020） 。我们描述染的AIMTOR中的C2C12细胞系和程序，以监控BRET在用酶标仪细胞群和单细胞显微镜。重要的是，该协议可转座至任何细胞系和原代细胞。另外，已经开发了几种亚细胞区室特异性的AIMTOR版本，使得能够对mTOR活性进行区室化评估。本协议描述了如何使用的敏感AIMTOR生物传感器研究mTOR信号动力学在活细胞中。
图形摘要：
从播种细胞到实时BRET记录的AIMTOR协议概述 ...
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| In vivo Bioluminescence Imaging of Luciferase-labeled Cancer Cells
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Author:
Date:
2016-03-20
[Abstract] Over the past decade, in vivo bioluminescent imaging has emerged as a non-invasive and sensitive tool for studying ongoing biological processes within living organisms (Contag et al., 1997; Contag et al., 1998). Based on the detection and quantitation of the photons produced by the oxidation of luciferin by luciferase enzymes (Harvey, 1927), this technique has proved to be particularly useful in analyzing cancerous cells and monitoring tumor growth (Edinger et al., 1999; Sweeney et al., 1999; Vidal et al., 2015), providing a cost-effective insight into how the disease progresses in vivo, without the need of serial sacrifice of animals. This protocol describes in detail the procedure of obtaining luciferase-tagged tumors in ...
[摘要] 在过去十年中，体内生物发光成像已经成为用于研究活生物体内正在进行的生物过程的非侵入性和敏感性工具（Contag等人，1997; Contag et al。，1998）。 基于通过荧光素酶氧化荧光素产生的光子的检测和定量（Harvey，1927），该技术已经证明在分析癌细胞和监测肿瘤生长中特别有用（Edinger等， ，1999; Sweeney等人，1999; Vidal等人，2015），提供了关于疾病在体内如何进展的成本效益的洞察 ，无需连续牺牲动物。 该协议详细描述了在免疫受损的小鼠中获得荧光素酶标记的肿瘤的程序，其可以通过使用IVIS光谱成像仪通过生物发光成像进行研究。
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