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Fetal Bovine Serum, qualified, USDA-approved regions

胎牛血清

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: 10437028
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Studying the Mechanisms of Developmental Vocal Learning and Adult Vocal Performance in Zebra Finches through Lentiviral Injection
Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract]  Here we provide a detailed step-by-step protocol for using lentivirus to manipulate miRNA expression in Area X of juvenile zebra finches and for analyzing the consequences on song learning and song performance. This protocol has four parts: 1) making the lentiviral construct to overexpress miRNA miR-9; 2) packaging the lentiviral vector; 3) stereotaxic injection of the lentivirus into Area X of juvenile zebra finches; 4) analysis of song learning and song performance in juvenile and adult zebra finches. These methods complement the methods employed in recent works that showed changing FoxP2 gene expression in Area X with lentivirus or adeno-associated virus leads to impairments in song behavior. [摘要]  在这里,我们提供了一个详细的逐步协议,用于使用慢病毒操纵幼年斑胸草雀X区的miRNA表达,并分析对歌曲学习和歌曲表现的影响。 该方案有四个部分:1)使慢病毒构建体过表达miRNA miR-9; 2)包装慢病毒载体; 3)将慢病毒立体定位注入少年斑胸草雀X区; 4)青少年和成年斑马雀的歌曲学习和歌曲表演分析。 这些方法补充了近期工作中使用的方法,这些方法显示,在区域X中用慢病毒或腺相关病毒改变 FoxP2 基因表达导致歌曲行为的损害。

【背景】具有良好特征的歌曲行为和基础神经回路的斑胸草雀提供了独特的动物模型来研究声音通信和相关感觉 - 运动学习的神经机制。近年来,一些实验室开始使用病毒载体来操纵斑胸草雀脑中的基因表达并研究其功能后果。这些努力通过对 FoxP2 基因的研究得到了最好的说明,该基因编码叉头盒p2转录因子。 FoxP2蛋白控制着数百个在神经系统发育中起重要作用的下游基因的表达。人类 FoxP2 基因的突变导致言语和语言障碍(Lai et al。,2001)。在鸣禽中,斑马雀X区域的 FoxP2 基因的敲除或过表达,对于声乐学习至关重要的基底神经节核,严重损害了歌曲的行为(Haesler et al。, 2007; Murugan et al。,2013; Heston and ...

Hypoxia Reporter Element Assay
Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract]  Hypoxia is a condition in which there is a decrease in oxygen supply to the cellular environment. Changes to cellular oxygen levels can lead to transcriptional changes of oxygen-regulated genes. Reporter assays are used to study gene expression alteration and modifications in response to environmental changes. Dual-reporter assays allow the simultaneous measurement of two different genes within a single cell, thus improving experimental accuracy. Within this protocol, we describe the utilization of the LightSwitch Dual Assay System to measure BMX expression in response to hypoxic conditions. [摘要]  缺氧是细胞环境中氧供应减少的一种情况。 细胞氧水平的变化可导致氧调节基因的转录变化。 报告分析用于研究响应环境变化的基因表达改变和修饰。 双报告分析允许同时测量单个细胞内的两个不同基因,从而提高实验准确性。 在该协议中,我们描述了LightSwitch双重测定系统的使用,以测量响应缺氧条件的BMX表达。

【背景】在我们最近的出版物(van Oosterwijk et al。,2018)中,我们试图检测BMX(一种非受体酪氨酸激酶)对索拉非尼治疗的反应。 BMX是一种Tec激酶家族成员,已知与酪氨酸磷酸化蛋白结合并通过与磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸结合而介导膜靶向(PIP3; Chen 等人,2013)。我们发现索拉非尼在有或没有基质细胞支持的急性髓性白血病(AML)细胞系中的直接治疗对BMX的上调没有贡献。以前的研究表明缺血可诱导BMX表达,索拉非尼具有抗血管生成活性(He et al。,2006; Davis et al。,2011)。因此,我们假设索拉非尼的抗血管生成活性导致骨髓内的缺氧环境,从而导致AML中缺氧依赖性BMX上调。在缺氧条件下,我们能够显示许多不同细胞系中BMX表达的显着增加。 BMX启动子的进一步分析在-5005处鉴定出推定的缺氧反应元件(HRE; ...

High Dimensional Functionomic Analysis of Human Hematopoietic Stem and Progenitor Cells at a Single Cell Level
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract]  The ability to conduct investigation of cellular transcription, signaling, and function at the single-cell level has opened opportunities to examine heterogeneous populations at unprecedented resolutions. Although methods have been developed to evaluate high-dimensional transcriptomic and proteomic data (relating to cellular mRNA and protein), there has not been a method to evaluate corresponding high-dimensional functionomic data (relating to cellular functions) from single cells. Here, we present a protocol to quantitatively measure the differentiation potentials of single human hematopoietic stem and progenitor cells, and then cluster the cells according to these measurements. High dimensional functionomic analysis of cell potential allows cell function to be linked to molecular ... [摘要]  在单细胞水平进行细胞转录,信号传导和功能调查的能力为以前所未有的决议研究异质人群开启了机会。 尽管已经开发了评估高维转录组学和蛋白质组学数据(与细胞mRNA和蛋白质有关)的方法,但尚未有方法从单个细胞评估相应的高维功能组学数据(与细胞功能有关)。 在这里,我们提出了一种方案来定量测量单个人造血干细胞和祖细胞的分化潜能,然后根据这些测量结果聚集细胞。 细胞电位的高维功能组分析允许细胞功能与相同祖细胞群体内的分子机制相关联。

【背景】单细胞水平的细胞转录,信号传导和功能单细胞测量技术的发展,以及流式细胞仪等先前存在的技术的发展,使得新镜头能够检测复杂的异质群体。这些方法产生大量数据,这可以借助于降维算法来解释,如使用Mpath,Monocole,PCA,Wishbone或扩散图算法在单细胞RNA-Seq上所示的(Paul等, 2016年;参见 et al。,2017),以及使用tSNE或PhenoGraph的CyTOF(Amir et al。,2013; Levine et al 。,2015)。

我们开发了这个协议,以允许在单细胞环境中对造血祖细胞的大规模培养物进行功能分析和随后的降维。在这个协议中,我们描述了在细胞因子的基质细胞培养物中培养人CD34 ...

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