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Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)

青霉素 - 链霉素(10,000U / mL)

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: 15140148
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Transcytosis Assay for Transport of Glycosphingolipids across MDCK-II Cells
Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract]  Absorption and secretion of peptide and protein cargoes across single-cell thick mucosal and endothelial barriers occurs by active endocytic and vesicular trafficking that connects one side of the epithelial or endothelial cell (the lumen) with the other (the serosa or blood). Assays that assess this pathway must robustly control for non-specific and passive solute flux through weak or damaged intercellular junctions that seal the epithelial or endothelial cells together. Here we describe an in vitro cell culture Transwell assay for transcytosis of therapeutic peptides linked covalently to various species of the glycosphingolipid GM1. We recently used this assay to develop technology that harnesses endogenous mechanism of lipid sorting across epithelial cell barriers to enable ... [摘要]  单细胞厚粘膜和内皮屏障上的肽和蛋白质货物的吸收和分泌通过活性内吞和囊泡运输发生,其连接上皮细胞或内皮细胞(管腔)的一侧与另一侧(浆膜或血液)。 评估该途径的测定必须通过弱的或受损的细胞间连接强有力地控制非特异性和被动的溶质通量,所述细胞间连接将上皮细胞或内皮细胞密封在一起。 在这里,我们描述了一种体外>细胞培养Transwell测定法,用于与各种鞘糖脂GM1共价连接的治疗性肽的转胞吞作用。 我们最近使用该测定开发了技术,该技术利用跨上皮细胞屏障的脂质分选的内源机制,以实现肽和蛋白质治疗剂的口服递送。

【背景】
大分子穿过覆盖粘膜表面的单细胞厚的上皮屏障和衬在供给心肌和脑的血管的紧密内皮屏障上的运输通过内吞过程发生,该内吞过程将这些极化细胞的一侧与另一侧连接。该过程称为转胞吞作用(Garcia-Castillo et al。>,2017)。通过受体介导的内吞作用和穿过消化道和呼吸道粘膜的囊泡运输的免疫球蛋白的吸收和分泌最着名的是这一过程。对转胞吞作用的兴趣也受到利用该途径在紧密上皮和内皮屏障上递送治疗性肽和蛋白质的潜力的刺激(Thuenauer 等人,>,2017)。

转胞吞作用是一种活跃的(ATP驱动的)过程。在一些情况下,通过细胞间紧密连接在细胞周围被动扩散可以发生大分子跨越紧密上皮和内皮屏障的转运(Fung ...

Hair Follicle Stem Cell Isolation and Expansion
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract]  Stem cells are widely used for numerous clinical applications including limbal stem cell deficiency. Stem cell derived from the bulge region of the hair follicle have the ability to differentiate into a variety of cell types including interfollicular epidermis, hair follicle structures, sebaceous glands and corneal epithelial cells when provided the appropriate cues. Hair follicle stem cells are being studied as a valuable source of autologous stem cells to treat disease. The protocol described below details the isolation and expansion of these cells for eventual clinical application. We used a dual-reporter mouse model to visualize both isolation and eventual differentiation of these cells in a limbal stem cell-deficient mouse model. [摘要]  干细胞被广泛用于许多临床应用,包括角膜缘干细胞缺陷。 当提供适当的提示时,源自毛囊凸出区域的干细胞具有分化成多种细胞类型的能力,包括滤泡间表皮,毛囊结构,皮脂腺和角膜上皮细胞。 正在研究毛囊干细胞作为自体干细胞治疗疾病的宝贵来源。 下面描述的方案详细描述了这些细胞的最终临床应用的分离和扩增。 我们使用双报告小鼠模型来观察这些细胞在角膜缘干细胞缺陷小鼠模型中的分离和最终分化。

【背景】干细胞被广泛用于多种翻译和临床应用。一种这样的临床应用是用于治疗角膜缘干细胞缺陷(LSCD)。当角膜缘干细胞群存在功能障碍或丧失时,LSCD发生,这对于由于先天性或获得性病理而维持健康的眼表非常重要。 LSCD的主要治疗策略是从患者健康眼睛的角膜缘活检组织培养自体上皮细胞片(Pellegrini等人,1997; Shortt等人,2007) 。这种策略的局限性在于它只适用于患有单侧LSCD的患者。那些有双侧LSCD的患者必须依靠免疫相关活体供体或尸体组织的同种异体角膜缘活检。由于全身性免疫抑制治疗的需要和供体组织的有限可用性,治疗成功率降低。一些研究小组一直在研究使用培养的口腔粘膜细胞治疗LSCD并取得了一些成功。然而,这些细胞通常不能表达角膜上皮分化标记角蛋白12(Inatomi等,2006),并且经常导致外周血管新生的发展(Nakamura等人, ,2004; ...

Murine Hair Follicle Derived Stem Cell Transplantation onto the Cornea Using a Fibrin Carrier
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract]  The goal of this protocol is to establish a procedure for cultivating stem cells on a fibrin carrier to allow for eventual transplantation to the eye. The ability to transfer stem cells to a patient is critical for treatment for a variety of disorders and wound repair. We took hair follicle stem cells from the vibrissae of transgenic mice expressing a dual reporter gene under the control of the Tet-on system and the keratin 12 promoter (Meyer-Blazejewska et al., 2011). A clonal growth assay was performed to enrich for stem cells. Once holoclones formed they were transferred onto a fibrin carrier and cultivated to obtain a confluent epithelial cell layer. Limbal stem cell deficient (LSCD) mice were used as the transplant recipient in order to test for successful grafting and ... [摘要]  该方案的目标是建立一种在纤维蛋白载体上培养干细胞以允许最终移植到眼睛的程序。 将干细胞转移给患者的能力对于治疗各种疾病和伤口修复至关重要。 我们在Tet-on系统和角蛋白12启动子(Meyer-Blazejewska等人,2011)的控制下从表达双报告基因的转基因小鼠的触须中取出毛囊干细胞。 进行克隆生长测定以富集干细胞。 一旦形成holoclones,将它们转移到纤维蛋白载体上并培养以获得融合上皮细胞层。 将角膜缘干细胞缺陷(LSCD)小鼠用作移植受体以测试移植成功和最终分化为角膜上皮表型。

【背景】干细胞被广泛用作治疗工具,因此递送手段是必不可少的。实际上,许多研究人员和公司正在寻找将细胞输送到人体内以优化细胞存活以及整合到宿主组织中的最佳方式。注射方法已广泛用于动物模型,但往往导致生存和整合差。目前正在使用利用生物材料和手术装置的技术。一种用于输送干细胞的技术是纤维蛋白载体。纤维蛋白凝胶是可降解的生物聚合物,其可粘附于允许细胞附着,迁移和增殖的天然组织(Ehrbar et al。,2005)。纤维蛋白凝胶具有许多优点,包括生物相容性,受控降解(Kjaergard等人,1994; Sidelmann等人,2000),均匀细胞分布和高细胞接种效率(Swartz ,2005)。已经将纤维蛋白凝胶用于治疗皮肤烧伤(Pellegrini等人,1999; ...

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