| Ex vivo Culture of Adult Mouse Antral Glands
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] The tri-dimensional culture, initially described by Sato et al. (2009) in order to isolate and characterize epithelial stem cells of the adult small intestine, has been subsequently adapted to many different organs. One of the first examples was the isolation and culture of antral stem cells by Barker et al. (2010), who efficiently generated organoids that recapitulate the mature pyloric epithelium in vitro. This ex vivo approach is suitable and promising to study gastric function in homeostasis as well as in disease. We have adapted Barker’s protocol to compare homeostatic and regenerating tissues and here, we meticulously describe, step by step, the isolation and culture of antral glands as well as the isolation of single cells from antral glands that ...
[摘要] 为了分离和表征成年小肠的上皮干细胞，最初由Sato等人（2009）描述的三维培养物已经随后适应于许多不同的器官。其中一个例子是Barker等人（2010）分离和培养窦性干细胞，他们有效地产生了在体外重现成熟幽门上皮的组织细胞。这种“离体”方法是适合的，并且有希望研究体内平衡和疾病中的胃功能。我们已经调整了Barker的方案来比较稳态和再生组织，这里，我们一步一步地仔细地描述了窦腺的分离和培养，以及从细胞分选后可能用于培养的窦腺中分离单细胞一个例子（Fernandez Vallone等人，2016）。
背景来自腺体的小鼠成体干细胞可以在3D matrigel中离体生长，作为“迷你腺体”无限期（Barker等人，2010） 。与EGF，Noggin和R-spondin 1存在下生长的小鼠成年小肠的干细胞相比，胃干细胞需要进一步补充Fgf10，胃泌素，Wnt3a和更高浓度的R-螺旋菌素1（称为作为ENRFGW）获得生产性文化。直到最近，在干细胞消融后，在离体培养系统中成体再生窦腺是否生长，如果是这样，仍然是未知的。使用本方案，证明了内源性和再生的腺体在接种时不会类似地生长并且表现出不同的生长培养要求。
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| Ex vivo Culture of Fetal Mouse Gastric Epithelial Progenitors
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Isolation and tridimensional culture of murine fetal progenitors from the digestive tract represents a new approach to study the nature and the biological characteristics of these epithelial cells that are present before the onset of the cytodifferentiation process during development. In 2013, Mustata et al. described the isolation of intestinal fetal progenitors growing as spheroids in the ex vivo culture system initially implemented by Sato et al. (2009) to grow adult intestinal stem cells. Noteworthy, fetal-derived spheroids have high self-renewal capacity making easy their indefinite maintenance in culture. Here, we report an adapted protocol for isolation and ex vivo culture and maintenance of fetal epithelial progenitors from distal pre-glandular ...
[摘要] 来自消化道的鼠胎儿祖细胞的分离和三维培养代表了研究在发育过程中细胞分化过程开始前存在的这些上皮细胞的性质和生物学特征的新方法。在2013年，Mustata等人描述了在最初由佐藤等人实施的离体培养系统中分离作为球体生长的肠胎细胞祖细胞。 >（2009）增长成年肠干细胞。值得注意的是，胎儿衍生的球体具有较高的自我更新能力，使其在文化中的无限期维护变得容易。在这里，我们报告了用于分离和远离前胃腺胃生长为胃球体的胎儿上皮祖细胞的分离和离体培养和维持的修改方案（Fernandez Vallone等人， 2016）。
背景 来自腺体的小鼠成体干细胞可以在3D matrigel中离体生长，作为“迷你腺体”无限期（Barker等人，2010） 。与在EGF，Noggin和R-spondin 1存在下生长的小肠的干细胞相比，成年胃干细胞需要进一步补充Fgf10，胃泌素，Wnt3a和更高浓度的R-spondin 1以获得生产性 - 文化。相比之下，到目前为止，很少知道在发育期间排列前腺上皮细胞的胎儿细胞。到目前为止，它们的性质以及其离体的潜在生长特性未明确。基于以前的研究，确定胎儿小肠（Mustata等人，2013年）中存在的细胞，我们报告了作为球体的小鼠胎儿胃祖细胞的培养（Fernandez Vallone et al。 。，2016）。可以在2009年由佐藤等人先前报道的培养基中重复胃祖细胞以生长小肠成体干细胞，与成人型胃干细胞相反，它们不需要额外的生长因子补充（Fgf10，Wnt3a或胃泌素）。 ...
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| Electroretinogram (ERG) Recordings from Drosophila
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Author:
Date:
2015-11-05
[Abstract] Phototransduction is a process in which light is converted into electrical signals used by the central nervous system. Invertebrate phototransduction is a process mediated by the phosphoinositide signaling cascade, characterized by Phospholipase C (PLC) as the effector enzyme and the Transient Receptor Potential (TRP) channels as its target. The great advantage of using invertebrate photoreceptors is the simplicity of the preparation, the ease of light stimulation, the robust expression of key molecular components, and most importantly, the ability to apply the power of molecular genetics. This last feature is mainly attributed to Drosophila melanogaster as a preferred animal model.
The Electroretinogram (ERG) is an extracellular voltage recording from the entire eye, ...
[摘要] 光转导是将光转化为中枢神经系统使用的电信号的过程。无脊椎动物光转导是由磷酸肌醇信号级联介导的过程，其特征在于磷脂酶C（PLC）作为效应酶和瞬时受体电位（TRP）通道作为其靶标。使用无脊椎动物光感受器的巨大优势是制备的简单性，光刺激的容易性，关键分子组分的强大表达，最重要的是应用分子遗传学功能的能力。这最后一个特征主要归因于果蝇Melanogaster作为首选的动物模型。
视网膜电图（ERG）是从整个眼睛进行的细胞外电压记录，其反映了由于光刺激而引起的视网膜的总电活动。果蝇ERG光响应是稳健和容易获得的，因此使其成为识别由于突变导致的光反应缺陷的方便方法。延长的去极化后电位（PDA）是一种有用的ERG现象，可以在强烈的蓝光下从白眼苍蝇记录。由于光响应终止的失败，由于色素视紫红质的大量光转化引起的称为元视紫质的暗稳定状态。不同于轻度重合的ERG记录，其在光刺激停止后迅速下降到暗基线，在光偏移之后，PDA响应持续很长时间（小时）。然而，通过应用强烈的橙色光刺激，通过将视紫红质素转换回视紫红质，可以随时将该反应抑制到黑暗的基线（参见图7; Minke，2012）。 PDA已被用作筛选视觉缺陷突变体的重要工具（Minke，2012）。
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