| Flow Cytometry Analysis and Fluorescence-activated Cell Sorting of Myeloid Cells from Lung and Bronchoalveolar Lavage Samples from Mycobacterium tuberculosis-infected Mice
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Mycobacterium tuberculosis (Mtb) is transmitted by aerosol and can cause serious bacterial infection in the lung that can be fatal if left untreated. Mtb is now the leading cause of death worldwide by an infectious agent. Characterizing the early events of in vivo infection following aerosol challenge is critical for understanding how innate immune cells respond to infection but is technically challenging due to the small number of bacteria that initially infect the lung. Previous studies either evaluated Mtb-infected cells at later stages of infection when the number of bacteria in the lung is much higher or used in vitro model systems to assess the response of myeloid cells to Mtb. Here, we describe a method that uses fluorescent bacteria, a high-dose aerosol ...
[摘要] [摘要 ] 结核分枝杆菌（Mtb）通过气溶胶传播，可引起严重的肺部细菌感染，如果不及时治疗，可能致命。Mtb现在已成为全球传染病致死的主要原因。表征气溶胶激发后体内感染的早期事件对于了解先天免疫细胞如何对感染做出反应至关重要，但由于最初会感染肺的细菌数量少，因此在技术上具有挑战性。先前的研究或者在肺部细菌数量高得多时在感染后期评估Mtb感染的细胞，或者在体外使用 评估骨髓细胞对Mtb反应的模型系统。在这里，我们介绍一种使用荧光细菌，大剂量气溶胶感染模型和流式细胞术跟踪气溶胶感染和荧光激活细胞分选（FACS）之后立即分离肺中Mtb感染细胞的方法，以分离幼稚的旁观者，和Mtb感染的细胞用于下游应用，包括RNA测序。该协议提供了在肺环境中监视Mtb感染和细胞特异性反应的能力，已知该环境可调节常驻和募集人群的功能。使用此协议，我们发现肺泡巨噬细胞通过上调受转录因子Nrf2调节并有害于细菌早期控制的细胞保护性转录反应，在体内对Mtb感染作出反应。
[背景 ] 气溶胶传播是结核分枝杆菌（Mtb）感染自然周期的关键组成部分，有助于细菌的毒性并导致其在肺部的独特感染模式（North ，1995；Riley 等，1995）。 ; Pai et ...
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| Dual-sided Voltage-sensitive Dye Imaging of Leech Ganglia
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] In this protocol, we introduce an effective method for voltage-sensitive dye (VSD) loading and imaging of leech ganglia as used in Tomina and Wagenaar (2017). Dissection and dye loading procedures are the most critical steps toward successful whole-ganglion VSD imaging. The former entails the removal of the sheath that covers neurons in the segmental ganglion of the leech, which is required for successful dye loading. The latter entails gently flowing a new generation VSD, VF2.1(OMe).H, onto both sides of the ganglion simultaneously using a pair of peristaltic pumps. We expect the described techniques to translate broadly to wide-field VSD imaging in other thin and relatively transparent nervous systems.
[摘要] 在这个协议中，我们介绍了一种有效的方法，用于Tomina和Wagenaar（2017）中使用的电压敏感染料（VSD）加载和水蛭神经节成像。 解剖和染料加载程序是成功完成全神经节VSD成像的关键步骤。 前者需要去除覆盖水蛭节段神经节神经元的鞘，这是成功染料加载所需的。 后者需要使用一对蠕动泵同时轻柔地将新一代VSD VF2.1（OMe）.H流入神经节的两侧。 我们期望所描述的技术广泛地转化为其他薄且相对透明的神经系统中的宽视场VSD成像。
【背景】双面显微镜是一种宽视野荧光成像系统，由一对精确对准的显微镜组成，用于观察来自对面的神经元制剂并且一次显示不同的焦平面（Tomina and Wagenaar，2017）。通过将该光学系统与新一代电压敏感染料（VSD），VoltageFluor（Miller等人，2012; Woodford等人，2015），荧光可以同时从不同深度的神经元捕获编码具有高保真度膜电压的信号。我们将这种泛神经元记录系统应用于药用水蛭的神经系统，我们利用电生理学方法诱发虚构行为并定量控制可识别神经元的膜电位（Tomina and ...
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| Isolation and Purification of Viruses Infecting Cyanobacteria Using a Liquid Bioassay Approach
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Author:
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2018-01-20
[Abstract] The following protocol describes the isolation and purification of viruses infecting cyanobacteria using a liquid bioassay approach. Viruses infecting cyanobacteria are also known as cyanophages. This protocol was written specifically for the isolation of cyanophages infecting freshwater cyanobacteria particularly, cyanobacteria that cannot be cultured on solid media. The use of a clonal cyanobacterial culture is recommended for the isolation of viruses. Growth conditions (i.e., media, light cycle and temperature) should be modified based on the host of interest.
[摘要] 以下方案描述了使用液体生物测定方法分离和纯化感染蓝细菌的病毒。 感染蓝细菌的病毒也被称为噬藻体。 本协议是专门为分离感染淡水蓝藻的蓝藻，特别是不能在固体培养基上培养的蓝细菌而编写的。 推荐使用克隆蓝藻培养物来分离病毒。 生长条件（即，介质，光周期和温度）应根据感兴趣的主体进行修改。
【背景】蓝藻是海洋和淡水系统中重要的营养生物。作为其他的水生微生物，蓝藻受到病毒感染（Suttle，2000）。例如，在海洋沿海地区，感染聚球蓝细菌的病毒滴度。 （Suttle和Chan，1993; Waterbury和Valois，1993），可以达到10-5 ml-1，并且基于温度，盐度和宿主丰度而不同。尽管蓝细菌及其病毒（也称为“蓝藻”）具有生态重要性，但只有少数病毒已经从有限的蓝藻菌株中分离出来。因此，通过筛选新的蓝藻菌株来分离新病毒是非常有意义的。以下议定书对于海洋和淡水系统都是相关的，但下面的例子将重点讨论分离和纯化感染淡水蓝藻的病毒（Chénardet al。，2015）。液体生物测定方法优于使用固体基质的公开方案的优点是可以靶向无法耐受噬菌斑测定方法经常使用的较高温度或不能在固体培养基上生长的蓝细菌。
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