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Acetic acid

醋酸

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: A6283
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

In vivo Mouse Mammary Gland Formation
Author:
Date:
2020-07-05
[Abstract]  For years, the mammary gland serves as a perfect example to study the self-renew and differentiation of adult stem cells, and the regulatory mechanisms of these processes as well. To assess the function of given genes and/or other factors on stemness of mammary cells, several In vitro assays were developed, such as mammospheres formation assay, detection of stem cell markers by mRNA expression or flow cytometry and so on. However, the capacity of reconstruction of whole mount in the cleared fat pad of recipient female mice is a golden standard to estimate the stemness of the cells. Here we described a step-by-step protocol for in vivo mammary gland formation assay, including preparation of “cleared” recipients and mammary cells for implantation, the surgery process and ... [摘要]  [摘要 ] 多年来,乳腺一直是研究成体干细胞的自我更新和分化以及这些过程的调控机制的完美例证。为了评估给定的基因和/或其他因素对乳腺细胞的干性,有几个函数体外测定法开发出来,如微球体由mRNA表达形成试验,干细胞标志物的检测或流式细胞术等。然而,在雌性小鼠清除的脂肪垫中整个坐骨的重建能力是估计细胞干性的黄金标准。在这里,我们描述了体内的分步操作方案 乳腺形成测定,包括准备“清除”的受体和用于植入的乳腺细胞,手术过程以及如何评估实验结果。结合通过基因编辑和/或药物处理对乳腺细胞的操作,该方案在乳腺干细胞和乳腺发育的研究中可能非常有用。

[背景 ] 作为哺乳动物最典型的器官之一,乳腺(MG)是外分泌腺,负责泌乳。MG的发育受某些性激素的控制,这些激素的水平精确地调节了MG在不同发育阶段的结构,细胞组成和功能变化(Henigighausen and Robinson,2005)。许多遗传和环境因素都参与了乳腺干细胞的调控和MG的发育。为了研究这些因素的功能和机理,已经开发了几种方法,特别是用于评估乳腺细胞的干性。先前的研究表明,只有MG的基底细胞而非管腔细胞能够在受体雌性小鼠清除的脂肪垫中重建上皮树,这表明乳腺干细胞仅存在于基底谱系中(Van Keymeulen 等,2011)。 )。后来,包括我们在内的许多研究发现了乳腺干细胞的几种标志物(Prater ...

Lung Section Staining and Microscopy
Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract]  Our protocol describes immunofluorescent staining, hematoxylin and eosin staining and Masson’s trichrome staining on lung sections. [摘要]  我们的方案描述了免疫荧光染色,苏木精和伊红染色以及Masson在肺切片上的三色染色。

背景 肺的主要功能是气体交换。肺由各种专门的细胞和组织组成,包括支气管,细支气管和肺泡,以促进气体交换。为了研究小鼠模型中的肺发育或肺部疾病,可以从小鼠中去除肺,并将其冷冻并嵌入最佳切割温度(OCT)化合物或化学保藏并包埋在石蜡中。为了保持肺组织结构,我们用1ml OCT化合物填充肺,用于制备冷冻切片,或用于石蜡切片的10%缓冲福尔马林(Zhou等人,2016)。然后将肺切片从冷冻或石蜡包埋的肺切片并安装到载玻片上用于制备染色。我们使用冷冻组织切片进行基于抗体的免疫荧光染色,并使用石蜡包埋切片进行苏木精和伊红(H&E)染色或Masson三色染色。冷冻切片更快地准备免疫荧光染色,大多数抗体在冷冻切片上工作良好。石蜡切片也可用于免疫荧光染色,但需要脱蜡,补液和抗原检索。即使在抗原检索后,一些抗体在石蜡切片上也不能很好地工作。然而,石蜡样品可以在室温下储存很长时间,并且可以容易地切成非常薄的部分。石蜡切片保留比冷冻切片更好的组织形态,因此它们对于H&E或三色染色更好。
 免疫荧光染色是一种使用荧光团观察特异性结合其靶蛋白的抗体位置的免疫组织化学。 ...

Immunoprecipitation of Cell Surface Proteins from Gram-negative Bacteria
Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract]  The meningococcus (Neisseria meningitidis) remains an important threat to human health worldwide. This Gram-negative bacterium causes elevated disabilities and mortality in infected individuals. Despite several available vaccines, currently there is no universal vaccine against all circulating meningococcal strains (Vogel et al., 2013). Herein, we describe a new protocol that is capable of identifying only cell surface exposed proteins that play a role in immunity, providing this research field with a more straightforward approach to identify novel vaccine targets. Even though N. meningitidis is used as a model in the protocol herein described, this protocol can be used for any Gram-negative bacteria provided modifications and optimizations are carried out to ... [摘要]  脑膜炎球菌(脑膜炎奈瑟氏球菌)仍然是全球人类健康的重大威胁。这种革兰氏阴性细菌导致感染个体的残疾和死亡率升高。尽管有几种可用的疫苗,目前还没有针对所有循环脑膜炎球菌菌株的通用疫苗(Vogel等人,2013)。在这里,我们描述了一种能够识别仅在细胞表面暴露的蛋白质在免疫中发挥作用的新方案,为该研究领域提供了一种更直接的方法来鉴定新的疫苗靶标。即使使用脑膜炎奈瑟氏球菌作为本文所述方案中的模型,该方案可用于任何革兰氏阴性细菌,提供修饰和优化以使其适应不同的细菌和疾病特征(例如薄膜脆性,生长方法,血清抗体水平,等等)。


背景 尝试开发针对N型的新型疫苗。脑膜炎脑膜炎常常依赖于2D SDS-PAGE(二维十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳)和蛋白质印迹,随后MS(质谱)(Wheeler等人,2007))。然而,这种方法采用全细胞裂解物,鉴定出不具有疫苗潜力的大量蛋白质(Mendum等人,2009)。因此,我们旨在开发一种能够鉴别可能在免疫中起重要作用的细胞表面暴露蛋白质的方法。简言之,我们的方案包括生长感兴趣的病原体,用免疫个体的血清免疫沉淀表面抗原,并通过液相色谱 - ...

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