| Method for Prolonged Incubation of Brain Slices
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] Slices of neuronal tissue maintain a high degree of topographical and functional properties of neurons and glia and therefore are extensively used for measurements of neuronal activity at the molecular, cellular and network levels. However, the lifespan of slice preparations is narrow, averaging of 6-8 hours. Moreover, the average viability of brain slices varies according to animal age and region of interest, leading to the high variability and low reproducibility of recorded data.
Previous techniques to increase the viability of brain slices focused on reducing cytotoxicity by chemical means, including alterations of the artificial cerebrospinal fluid (aCSF) composition to alleviate the direct damage of the slicing procedure or adding protective antioxidants to reduce ...
[摘要] [摘要 ] 神经元组织的切片保持了神经元和神经胶质的高度地形和功能特性，因此被广泛用于在分子，细胞和网络水平上测量神经元的活性。然而，切片制剂的寿命很窄，平均为6-8小时。而且，脑切片的平均生存力会根据动物的年龄和目标区域而变化，从而导致记录数据的高变异性和低再现性。
先前增加脑切片活力的技术集中于通过化学手段降低细胞毒性，包括改变人工脑脊液（aCSF ）成分以减轻切片过程的直接损害或添加保护性抗氧化剂以减少细胞退化。在该协议中，我们将体温过低与恢复室中aCSF 条件（pH，温度和细菌水平）的牢固控制结合使用，以显着延长切片的生存能力。
考虑到其用途的广度，提高切片的生存能力和寿命可以大大提高数据的可重复性，并减少神经生理学研究中使用的动物的成本，时间和数量。
[背景 ] 神经组织切片提供基本的神经科学研究独特的优势，因为它使神经网络活动的直接调查和药理化合物对中枢神经系统的影响。因此，迫切需要为实验目的以最高质量制备和维持切片的活力。神经元切片的生存能力取决于几个内在和外在因素（Buskila 等人，2014），根据切片过程可将其分为三个阶段：切片前（切片前），切片中（切片）和切片后切片）切片程序。在切片前降低切片活力的主要因素包括局部缺血和缺氧，这是由于消除了持续供血引起的（Buskila et ...
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| Stereotaxic Adeno-associated Virus Injection and Cannula Implantation in the Dorsal Raphe Nucleus of Mice
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2017-09-20
[Abstract] Optogenetic methods are now widespread in neuroscience research. Here we present a detailed surgical procedure to inject adeno-associated viruses and implant optic fiber cannulas in the dorsal raphe nucleus (DRN) of living mice. Combined with transgenic mouse lines, this protocol allows specific targeting of serotonin-producing neurons in the brain. It includes fixing a mouse in a stereotaxic frame, performing a craniotomy, virus injection and fiber implantation. Animals can be later used in behavioral experiments, combined with optogenetic manipulations (Dugué et al., 2014; Correia et al., 2017) or monitoring of neuronal activity (Matias et al., 2017).
The described procedure is a fundamental step in both optogenetic and fiber photometry experiments ...
[摘要] 光神学研究现在广泛存在。在这里，我们提供一个详细的外科手术，以注射腺相关病毒和植入光纤插管在活的小鼠背侧核心（DRN）。结合转基因小鼠系，该方案允许在脑中特异性靶向产生5-羟色胺的神经元。它包括将鼠标固定在立体定位框架中，执行开颅手术，病毒注射和纤维植入。动物可以随后用于行为实验，结合光遗传操作（Dugué等，2014; Correia等，2017）或监测神经元活动（Matias等，2017）。
所描述的程序是深部脑区域的光生和光纤测光实验中的基本步骤。它针对DRN中的血清素神经元进行了优化，但可以应用于任何其他细胞类型和脑区域。当使用表达功能相关水平的光遗传工具或报告物系的转基因小鼠品系时，可以跳过病毒注射步骤，并将该方案降低到插管植入程序。
【背景】随着光遗传学方法的出现，使用光纤和遗传编码的探针来操纵或监测大脑活动已迅速扩大。光致发光工具对于研究神经调节系统特别有用，因为它们通常以位于深部脑区域的神经元簇为特征，对多个脑区域进行长期和广泛的预测。先前已经针对脑中的不同区域描述了病毒注射和纤维插管植入（例如，腹侧被盖区域[Tsai等人，2009]，基因座（Carter等，2010））。
鉴于其深部解剖学位置在导管和上矢状窦下方，针对背侧核心核（DRN，血清素投影到前脑的主要来源）可能是复杂的。使用标准的外科手术可能导致大量出血和低成功率，导致样本量较小（Ranade和Mainen ...
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| An ex vivo Perifusion Method for Quantitative Determination of Neuropeptide Release from Mouse Hypothalamic Explants
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Date:
2017-08-20
[Abstract] The hypothalamus is a primary brain area which, in mammals, regulates several physiological functions that are all related to maintaining general homeostasis, by linking the central nervous system (CNS) and the periphery. The hypothalamus itself can be considered an endocrine brain region of some sort as it hosts in its different nuclei several kinds of neuropeptide-producing and -secreting neurons. These neuropeptides have specific roles and participate in the regulation of homeostasis in general, which includes the regulation of energy metabolism, feeding behavior, water intake and body core temperature for example.
As previously mentioned, in order to exert their effects, these peptides have to be produced but also, and mostly, to be secreted. In this context, it is of ...
[摘要] 下丘脑是一个主要的脑区域，在哺乳动物中，通过连接中枢神经系统（CNS）和周围环境来调节与维持一般体内平衡有关的几种生理功能。下丘脑本身可以被认为是某种类型的内分泌大脑区域，因为它在其不同的核中存在几种神经肽产生和分泌神经元。这些神经肽具有特定的作用并参与一般的体内平衡调节，其中包括调节能量代谢，摄食行为，进水量和身体核心温度。
如前所述，为了发挥其效果，必须产生这些肽，而且大部分是分泌的。在这种情况下，能够评估某些病症，疾病或治疗如何能够真正影响神经肽的分泌以及不同的神经肽能电路的功能是非常重要的。
评估这一点的一种方法是下丘脑外植体的渗透，然后定量收集的部分中的肽。
在这里，我们逐步解释如何在体外渗出下丘脑外植体中收集分数，其中可以从这些活的分离组织定量测定神经肽/神经激素释放。下丘脑渗出与其他现有测定相比有两大优点：（1）允许药理学操作来解剖下丘脑外植体中不同神经肽/神经激素释放的信号传导机制，以及（2）允许在多种下丘脑制剂上同时进行不同条件的实验，（3）据我们所知，这是允许研究神经肽分泌在基础条件下和用同样的下丘脑外植体反复刺激的唯一方法。
【背景】已经经常使用渗透研究胰岛功能。然而，该测定原则上适用于任何内分泌组织和任何肽或蛋白质分泌。
事实上，过去已经使用了不同的渗透系统，并且仍然是不同研究实验室在各种条件下研究下丘脑神经肽释放的有效程序。例如，Callewaere及其同事在2006年发表了一项研究，分析了趋化因子SDF-1（基质细胞衍生因子-1）对血管舒张素诱导的AVP（精氨酸 ...
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