| Advances in Proximity Ligation in situ Hybridization (PLISH)
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Author:
Date:
2020-11-05
[Abstract] Understanding tissues in the context of development, maintenance and disease requires determining the molecular profiles of individual cells within their native in vivo spatial context. We developed a Proximity Ligation in situ Hybridization technology (PLISH) that enables quantitative measurement of single cell gene expression in intact tissues, which we have now updated. By recording spatial information for every profiled cell, PLISH enables retrospective mapping of distinct cell classes and inference of their in vivo interactions. PLISH has high sensitivity, specificity and signal to noise ratio. It is also rapid, scalable, and does not require expertise in molecular biology so it can be easily adopted by basic and clinical researchers.
[摘要] [摘要]在发育，维持和疾病的背景下了解组织需要确定单个细胞在其天然体内空间范围内的分子谱。我们开发了一种邻近连接原位杂交技术（PLISH），该技术能够定量测量完整组织中单细胞基因的表达，现已更新。通过记录每个分析细胞的空间信息，PLISH可以回顾性绘制不同细胞类别并推断其体内 互动。PLISH具有很高的灵敏度，特异性和信噪比。它也快速，可扩展，并且不需要分子生物学方面的专门知识，因此基础和临床研究人员可以轻松地采用它。
[背景技术]我们最近开发了一种复用原位称为PLISH（邻位连接杂交技术原位杂交）（Nagendran等人，2018）。PLISH与其他现有的空间转录组学技术不同，因为它结合了高性能，快速多路复用，低成本和技术简单性（Wilbrey -Clark等人，2020年）。可以通过自动计算完整的冷冻或石蜡包埋组织中单细胞表达图谱来分析PLISH结果，它与同时进行的免疫染色兼容。
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| Murine Hair Follicle Derived Stem Cell Transplantation onto the Cornea Using a Fibrin Carrier
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] The goal of this protocol is to establish a procedure for cultivating stem cells on a fibrin carrier to allow for eventual transplantation to the eye. The ability to transfer stem cells to a patient is critical for treatment for a variety of disorders and wound repair. We took hair follicle stem cells from the vibrissae of transgenic mice expressing a dual reporter gene under the control of the Tet-on system and the keratin 12 promoter (Meyer-Blazejewska et al., 2011). A clonal growth assay was performed to enrich for stem cells. Once holoclones formed they were transferred onto a fibrin carrier and cultivated to obtain a confluent epithelial cell layer. Limbal stem cell deficient (LSCD) mice were used as the transplant recipient in order to test for successful grafting and ...
[摘要] 该方案的目标是建立一种在纤维蛋白载体上培养干细胞以允许最终移植到眼睛的程序。 将干细胞转移给患者的能力对于治疗各种疾病和伤口修复至关重要。 我们在Tet-on系统和角蛋白12启动子（Meyer-Blazejewska等人，2011）的控制下从表达双报告基因的转基因小鼠的触须中取出毛囊干细胞。 进行克隆生长测定以富集干细胞。 一旦形成holoclones，将它们转移到纤维蛋白载体上并培养以获得融合上皮细胞层。 将角膜缘干细胞缺陷（LSCD）小鼠用作移植受体以测试移植成功和最终分化为角膜上皮表型。
【背景】干细胞被广泛用作治疗工具，因此递送手段是必不可少的。实际上，许多研究人员和公司正在寻找将细胞输送到人体内以优化细胞存活以及整合到宿主组织中的最佳方式。注射方法已广泛用于动物模型，但往往导致生存和整合差。目前正在使用利用生物材料和手术装置的技术。一种用于输送干细胞的技术是纤维蛋白载体。纤维蛋白凝胶是可降解的生物聚合物，其可粘附于允许细胞附着，迁移和增殖的天然组织（Ehrbar et al。，2005）。纤维蛋白凝胶具有许多优点，包括生物相容性，受控降解（Kjaergard等人，1994; Sidelmann等人，2000），均匀细胞分布和高细胞接种效率（Swartz ，2005）。已经将纤维蛋白凝胶用于治疗皮肤烧伤（Pellegrini等人，1999; ...
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| Determination of Reduced and Total Glutathione Content in Extremophilic Microalga Galdieria phlegrea
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Date:
2017-07-05
[Abstract] Glutathione is an important molecule involved in the primary and secondary metabolism of all organisms. The Glutathione redox status is an indicator of the cellular redox state. Therefore, it is important to have precise methods on hand to determine the glutathione redox status in the cell. In this protocol, we describe an improved spectrophotometric method to estimate the content of reduced (GSH) and oxidized (GSSG) forms of glutathione in the extremophilic microalga Galdieria phlegrea.
[摘要] 谷胱甘肽是涉及所有生物体的初级和次级代谢的重要分子。 谷胱甘肽氧化还原状态是细胞氧化还原状态的指标。 因此，重要的是要有精确的方法来确定细胞中的谷胱甘肽氧化还原状态。 在本协议中，我们描述了一种改进的分光光度法，用于估计极地微藻Galdieria phlegrea中还原（GSH）和氧化（GSSG）形式的谷胱甘肽的含量。
【背景】谷胱甘肽（γ-L-谷氨酰基-L-半胱氨酰 - 甘氨酸）是存在于所有已知生物体中的必需三肽，其范围从细菌到人类（Frendo等人，2013）。它涉及到几种不同的细胞保护作用（图1）。谷胱甘肽被认为是具有氧化还原信号功能的优异的抗氧化分子。它还参与对非生物和生物胁迫的反应，并涉及细胞的初级代谢（C，N，S代谢）（Noctor et al。，2012;Hernándezet al。 ，2015; Salbitani等人，2015）。
＆NBSP;在植物细胞中，还原型和氧化形式的谷胱甘肽（GSH / GSSG）之间的比例在信号传导和许多防御机制的激活中起重要作用（Foyer和Noctor，2012; Salbitani等人， ，2015）。通常严格控制的GSH / GSSG氧化还原状态可能在应力条件下瞬时转向稍微氧化的值（Tausz等人，2004）。
＆NBSP;在过去，一些研究人员已经开发和修改了分光光度法来确定几种生物体中的GSH和GSSG（Anderson，1985; ...
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