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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] CRISPR/Cas9 system is a recently developed genome editing tool, and its power has been demonstrated in many organisms, including some plant species (Wang et al., 2016). In eukaryotes, the Cas9/gRNA complexes target genome sites specifically and cleave them to produce double-strand breaks (DSBs), which can be repaired by non-homologous end joining (NHEJ) pathway (Wang et al., 2016). Since NHEJ is error prone, mutations are thus generated. In plants, delivery of genome editing reagents is still challenging. In this protocol, we detail the procedure of a virus-based gRNA delivery system for CRISPR/Cas9 mediated plant genome editing (VIGE). This method offers a rapid and efficient way to deliver gRNA into plant cells, especially for those that are recalcitrant to ...
[摘要] CRISPR / Cas9系统是最近开发的基因组编辑工具，其功能已被证实在许多生物体中，包括一些植物物种（Wang等人，2016）。 在真核生物中，Cas9 / gRNA复合物特异性地靶向基因组位点并切割它们以产生双链断裂（DSB），其可以通过非同源末端连接（NHEJ）途径修复（Wang等人， 。，2016）。 由于NHEJ易出错，因此产生突变。 在植物中，基因组编辑试剂的递送仍然是挑战性的。 在本协议中，我们详细介绍了CRISPR / Cas9介导的植物基因组编辑（VIGE）的基于病毒的gRNA传递系统的过程。 该方法提供了将gRNA递送到植物细胞中的快速且有效的方式，特别是对于那些难以转基因农杆菌的方法。
已经报道了基于病毒的基因组编辑技术使用解构DNA病毒和RNA病毒（Baltes等人，2014; Ali等人，2015）。 最近，我们使用了一种完整的双因素病毒 - 卷心菜叶卷曲病毒（CaLCuV）（一种感染广西芥菜科的成员，包括花椰菜的二分酵母病毒），用于高效率 第一次（Yin等人，2015年），其主机之一的基因组编辑（Nicotiana benhamiana）首次进行基因组编辑。
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Author:
Date:
2015-08-20
[Abstract] Telomerase is a large ribonucleoprotein complex that replicates the linear chromosome ends in most eukaryotes. Large-scale preparation of the telomerase core components in vitro has long been a big challenge in this field, hindering the understanding of the catalytic mechanism of telomerase, as well as slowing down the development of telomerase inhibitors for cancer therapy. We have successfully developed a protocol for large-scale preparation of the TRBD-CR4/5 complex of the medaka telomerase in vitro, and used this method to study the high-resolution structure of the TRBD-CR4/5 complex by X-ray crystallography. This procedure may be also adapted to purify other protein-RNA complexes for structural studies.
[摘要] 端粒酶是在大多数真核生物中复制线性染色体末端的大核糖核蛋白复合物。 体外大规模制备端粒酶核心组分长期以来一直是该领域的一个大挑战，阻碍了对端粒酶的催化机理的理解，以及减慢端粒酶抑制剂对癌症的发展 治疗。 我们成功地开发了用于大规模制备体外的medaka端粒酶的TRBD-CR4/5复合物的方案，并且使用该方法研究TRBD-CR4/5复合物的高分辨率结构， 5复合物通过X射线晶体学。 该程序也可以适于纯化其它蛋白质-RNA复合物用于结构研究。
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