| Histological and Immunohistochemical Examination of Stem Cell Proliferation and Reepithelialization in the Wounded Skin
|
|
Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] The skin is the largest organ that protects our body from the external environment and it is constantly exposed to pathogenic insults and injury. Repair of damage to this organ is carried out by a complex process involving three overlapping phases of inflammation, proliferation and remodeling. Histological analysis of wounded skin is a convenient approach to examine broad alterations in tissue architecture and investigate cells in their indigenous microenvironment. In this article we present a protocol for immunohistochemical examination of wounded skin to study mechanisms involved in regulating stem cell activity, which is a vital component in the repair of the damaged tissue. Performing such histological analysis enables the understanding of the spatial relationship between cells that ...
[摘要] [摘要]皮肤是保护我们的身体免受外界环境影响最大的器官，并且不断受到病原体的伤害和伤害。修复该器官的水坝年龄是通过复杂的过程进行的，该过程涉及炎症，增殖和重塑的三个重叠阶段。对受伤的皮肤进行组织学分析是检查组织结构的广泛变化并研究其固有微环境中的细胞的便捷方法。在本文中，我们提出了一种用于受伤皮肤的免疫组织化学检查的方案，以研究参与调节干细胞活性的机制，这是修复受损组织的重要组成部分。进行这种组织学分析可以了解在特殊伤口微环境中相互作用的细胞之间的空间关系。本文所述的分析工具，允许邻近伤口和重新程度的干细胞的再生能力的定量测量-伤口闭合过程中的上皮。这些协议可以适用于研究受伤皮肤内的众多细胞过程和细胞类型。
[背景]皮肤具有巨大的再生能力，这归因于位于整个器官不同部位的众多常驻干细胞种群的存在。免疫组织学方法与目标细胞的遗传标记相结合，已大大提高了体内对干细胞调节和组织稳态的认识（Blanpain等，2004）。这些方法已用于鉴定与毛囊相关的多个干细胞群体，包括位于毛发隆突中的表皮和黑素细胞干细胞，次级毛发芽中的快速循环祖细胞以及真皮鞘中存在的真皮干细胞（Greco等。，2009;拉赫马尼等人，2020）。这些干细胞具有自我更新，多能性和高度增殖性，可在生理性毛发循环过程中再生组织，并在伤口愈合过程中修复损伤。引人注目的是，由于这些细胞分裂并迅速向伤口部位进展，使上皮中的干细胞对皮肤损伤迅速做出反应，从而使伤口重新上皮化（Ito等人，2005）。 ...
|
|
|
| Modifying Styrene-maleic Acid Co-polymer for Studying Lipid Nanodiscs by Direct Fluorescent Labeling
|
|
Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] This protocol was developed to functionalize styrene maleic acid (SMA) by direct fluorescent labeling in an easy way, accessible to biochemistry laboratories. This novel method is based on the coupling of carboxylic acids to primary amines using a carbodiimide, a reaction commonly used for protein chemistry. The procedure uses the hydrolyzed styrene-maleic acid copolymer and occurs entirely in aqueous solution with mild conditions compatible with many biomolecules.
[摘要] 该协议旨在通过直接荧光标记以简单的方式使苯乙烯马来酸（SMA）功能化，生物化学实验室可以使用。 该新方法基于使用碳二亚胺（一种常用于蛋白质化学的反应）将羧酸偶联到伯胺上。 该方法使用水解的苯乙烯 - 马来酸共聚物并且完全在水溶液中发生，具有与许多生物分子相容的温和条件。
【背景】膜蛋白体外的表征可能非常具有挑战性（Grisshammer和Tate，1995）。除了过度表达和膜分离的困难之外，还需要从其天然环境中提取膜蛋白。必需的溶解步骤通常需要使用去污剂来代替天然脂质环境，这通常会导致膜蛋白的结构和/或活性的丧失（Duquesne 等人，2016）。出于这个原因，已经开发了几种替代选择，例如amphipols（Popot，2010），以避免与洗涤剂相关的一些困难并保持膜蛋白的溶解度。几年前，苯乙烯马来酸（SMA）共聚物更常用作低分子量洗涤剂策略的替代品（Dorr et al。，2014; Jamshad et al。 ，2015; Prabudiansyah et al。，2015）。已经证明SMA能够自发地溶解生物膜并产生平均尺寸为10nm的圆盘形颗粒。这些纳米圆盘（称为SMALP）含有嵌入来自膜和SMA共聚物的脂质中的蛋白质混合物，将颗粒保持在溶液中（Knowles 等人，，2009）。 ...
|
|
|
| Identification and Quantitation of Leukocyte Populations in Human Kidney Tissue by Multi-parameter Flow Cytometry
|
|
Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Inflammatory immune cells play direct pathological roles in cases of acute kidney injury (AKI) and chronic kidney disease (CKD). However, the identification and characterization of distinct populations of leukocytes in human kidney biopsies have been confounded by the limitations of immunohistochemical (IHC)-based techniques used to detect them. This methodology is not amenable to the combinations of multiple markers necessary to unequivocally define discrete immune cell populations. We have developed a multi-parameter, flow cytometric-based approach that addresses the need for panels of cell-specific markers in the identification of immune cell populations, allowing both the accurate detection and quantitation of leukocyte subpopulations from a single, clinical kidney biopsy specimen. In ...
[摘要] 炎症性免疫细胞在急性肾损伤（AKI）和慢性肾病（CKD）的病例中发挥直接的病理作用。然而，人肾活组织检查中不同白细胞群的鉴定和表征已被用于检测它们的基于免疫组织化学（IHC）的技术的局限性所混淆。该方法不适用于明确定义离散免疫细胞群所必需的多种标志物的组合。我们开发了一种多参数，基于流式细胞仪的方法，解决了在鉴定免疫细胞群体时需要细胞特异性标记组，从而允许从单个临床肾活检标本中准确检测和定量白细胞亚群。在该方法中，将新鲜的人肾组织解离成单细胞悬浮液，然后进行抗体标记和基于流式细胞术的采集和分析。这种新技术为鉴定和计数人类肾脏疾病中的免疫细胞亚群提供了重大进步，并且是补充临床肾脏活组织检查的传统组织病理学检查的有力平台。
【背景】 肾脏疾病的发病率和患病率正在上升，给全世界的医疗保健社区带来了沉重的负担，并显着影响了患者的生活质量（世界肾脏日：慢性肾病，2015年）。肾脏损害可能由多种损伤引起，包括感染，缺血，毒素，高血压，遗传和代谢紊乱（Imig和Ryan，2013）。对功能性损伤的即时反应是急性肾损伤（AKI），这是一种临床综合征，其特征在于生理上通过肾功能的快速（数小时至数天）降低和组织形态学上通过炎性免疫细胞浸润到肾小管中，组织隔室邻接小管。肾脏（Basile ...
|
|
|