| Analysis of Replicative Intermediates of Adeno-associated Virus through Hirt Extraction and Southern Blotting
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] Adeno-associated virus (AAV) is a small single-stranded DNA virus that requires the presence of a helper virus, such as adenovirus or herpes virus, to efficiently replicate its genome. AAV DNA is replicated by a rolling-hairpin mechanism (Ward, 2006), and during replication several DNA intermediates can be detected. This detailed protocol describes how to analyze the AAV DNA intermediates formed during AAV replication using a modified Hirt extract (Hirt, 1967) procedure and Southern blotting (Southern, 1975).
[摘要] 腺相关病毒（AAV）是一种小型单链DNA病毒，需要存在辅助病毒，如腺病毒或疱疹病毒，以有效地复制其基因组。 AAV DNA通过滚转发夹机制（Ward，2006）进行复制，并且在复制期间可以检测出几种DNA中间体。该详细方案描述了如何使用改良的Hirt提取物（Hirt，1967）程序和Southern印迹（Southern，1975）分析在AAV复制期间形成的AAV DNA中间体。
背景 AAV DNA复制通过滚动发夹机制在由AAV和辅助病毒如腺病毒或疱疹病毒共感染的细胞中进行（Ward，2006）。 AAV DNA由4.7kb的线性DNA分子和倒置的末端重复（ITR）组成，折叠形成T形发夹结构。 3'末端发夹作为AAV DNA复制的引物。这些发夹结构由AAV Rep蛋白再生，允许进一步复制（Im和Muzyczka，1990）。 AAV DNA的+和 - 链都被包装并且是感染性的（Rose等人，1969）。当分析复制AAV DNA时，可以检测到几种复制中间体（Straus等人，1976）。最丰富的复制中间体是由AAV DNA的一个和一个链形成的线性单体双链体分子，其被认为是将包装在预先形成的衣壳中的后代单链分子的直接前体（Straus ，1976）。二聚体复制中间体也是常见的，AAV复制模型与甚至更大的复制中间体相容。 ...
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| Measurement of Net High-affinity Urea Uptake in Maize Plants
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Author:
Date:
2015-06-05
[Abstract] Despite its extensive use as a nitrogen fertilizer, the role of urea as a directly accessible nitrogen source for crop plants is still poorly understood. So far, the physiological and molecular aspects of urea acquisition have been investigated only in a few plant species highlighting the importance of a urea transporter in roots, DUR3 (Kojima et al., 2007; Wang et al., 2012; Zanin et al., 2014a). Regarding maize plants, a crop that needs a large amount of urea fertilizer, the capability to take up urea via an inducible and high-affinity transport system has been recently characterized (Zanin et al., 2014a; Zanin et al., 2014b). Here, we described a small-scale protocol suitable for the measurement of urea net high-affinity uptake in roots of ...
[摘要] 尽管其作为氮肥的广泛使用，但是作为直接可及的作物植物氮源的脲的作用仍然知之甚少。 迄今为止，仅在少数植物物种中研究了尿素获取的生理学和分子学方面，突出了根中的尿素转运蛋白DUR3的重要性（Kojima等人，2007; et al。，2012; Zanin et al。，2014a）。 关于玉米植物，需要大量尿素肥料的作物，通过诱导型和高亲和力转运系统摄取尿素的能力最近已被表征（Zanin等人，2014a; Zanin et al。，2014b）。 在这里，我们描述了一个小规模的协议，适合测量尿素净高亲和力摄取完好的玉米植物的根。
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