| Hydrogen Deuterium Exchange Mass Spectrometry of Oxygen Sensitive Proteins
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Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] The protocol detailed here describes a way to perform hydrogen deuterium exchange coupled to mass spectrometry (HDX-MS) on oxygen sensitive proteins. HDX-MS is a powerful tool for studying the protein structure-function relationship. Applying this technique to anaerobic proteins provides insight into the mechanism of proteins that perform oxygen sensitive chemistry. A problem when using HDX-MS to study anaerobic proteins is that there are many parts that require constant movement into and out of an anaerobic chamber. This can affect the seal, increasing the likelihood of oxygen exposure. Exposure to oxygen causes the cofactors bound to these proteins, a common example being FeS clusters, to no longer interact with the amino acid residues responsible for coordinating the FeS clusters, ...
[摘要] 本文详述的方案描述了一种在氧敏感蛋白质上进行氢氘交换偶联质谱（HDX-MS）的方法。 HDX-MS是研究蛋白质结构 - 功能关系的强大工具。将这种技术应用于厌氧蛋白质可以深入了解执行氧敏化学的蛋白质的机制。使用HDX-MS研究厌氧蛋白时的一个问题是，有许多部分需要不断运动进出厌氧室。这会影响密封，增加氧气暴露的可能性。暴露于氧气使得与这些蛋白质结合的辅因子（一个常见的例子是FeS簇）不再与负责配位FeS簇的氨基酸残基相互作用，造成簇的丢失和蛋白质的不可逆失活。为了解决这个问题，开发了一种双瓶系统，可以厌氧地制备溶液和反应混合物，但也可以将这些溶液转移到有氧环境中，同时屏蔽溶液中的氧气。此外，运动不受限制，就像厌氧室一样，确保更一致的数据，并在反应过程中减少错误。
【背景】许多氧敏感蛋白质是生物在缺氧环境中繁殖所必需的。这些蛋白质中的一些通过被称为基于黄素的电子分叉（FBEB）（Lubner等，2017）的方法向厌氧微生物提供替代的能量供应。 FBEB产生还原型铁氧还蛋白，可被氧化产生能量。能够降低铁氧还蛋白的蛋白质引起了极大的兴趣，并且一直是最近使用HDX-MS研究的重点（Demmer et al。，2016; Lubner 等人）， 2017; Berry等人，2018）。 ...
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| Rust Removal Experiments
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Author:
Date:
2016-04-05
[Abstract] Iron oxidation, known as rust formation, causes enormous loss in term of property damages and associated economic risks. Depending on the degree of formation, rust consists of several layers of iron in different oxidation states. The brownish top layer is mostly iron (III) oxide-hydroxide [FeO(OH), Fe(OH)3] while the deepest black layers possess iron oxide (Fe2O3.nH2O). The flaky nature of surface rust meditates diffusion of oxygen and water to inner material sections which can lead to total disintegration of iron mass. As a result, it is desirable to remove rust and protect fresh surface from oxidizers. The common rust removal reagents are mainly based on complex formation of ferric ion with organic and inorganic acids such as citric ...
[摘要] 铁氧化，被称为生锈，导致财产损失和相关的经济风险的巨大损失。根据形成的程度，锈由几层不同氧化态的铁组成。褐色顶层主要是氧化铁（III） - 氧化物[FeO（OH），Fe（OH）3]，而最深的黑色层具有氧化铁（Fe 2 O 3） O 3 。 nH O）。表面锈蚀的片状性质沉积了氧气和水扩散到内部材料部分，这可能导致铁质的完全分解。因此，希望除去锈和保护新鲜表面免受氧化剂的影响。常见的除锈剂主要基于三价铁离子与有机和无机酸如柠檬酸，草酸和磷酸的络合物形成。除锈能力通常是定性观察，其使得治疗选择之间的直接比较繁琐（如果不是不切实际的话）。在我们最近的工作（Ahmadi等人，2015）中，我们开发了一种比色测定法，用于测量除铁处理介质中的铁浓度，使用细菌产生的铁载体（yersiniabactin）与商业生锈去除试剂。在该方法中，铁浓度与在不同去除剂的存在下溶解的锈的质量相关。该测定基于1,10-菲咯啉测定（Skoog和West，1979）的修饰，以使得能够使用96孔板格式进行更高通量筛选和评估的检测。
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