| Analysis of Xyloglucan Composition in Arabidopsis Leaves
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Author:
Date:
2017-10-05
[Abstract] Xyloglucan is one of the main components of the primary cell wall in most species of plants. This protocol describes a method to analyze the composition of the enzyme-accessible and enzyme-inaccessible fractions of xyloglucan in the model species Arabidopsis thaliana. It is based on digestion with an endoglucanase that attacks unsubstituted glucose residues in the backbone. The identities and relative amounts of released xyloglucan fragments are then determined using MALDI-TOF mass spectrometry.
[摘要] 木葡聚糖是大多数植物种类中主要细胞壁的主要成分之一。 该方案描述了一种分析拟南芥拟南芥中木葡聚糖的可酶酶和不可酶酶级分的组成的方法。 它是基于内切葡聚糖酶的消化，其攻击骨架中的未取代的葡萄糖残基。 然后使用MALDI-TOF质谱法测定释放的木葡聚糖片段的身份和相对量。
【背景】在许多开花植物中，木葡聚糖是主要细胞壁的主要成分，其在生长调节中起重要作用。顺序提取方案提供了分离不同木葡聚糖结构域的方法（Pauly et al。，1999）。一些木葡聚糖似乎被捕获在纤维素微原纤维内，而另一部分通过氢键结合到它们的表面。木葡聚糖的其余部分（可能大多数）占据了微原纤维之间的距离（Park和Cosgrove，2015）。可以通过细胞壁材料的直接内切葡聚糖酶消化来提取部分后来的木葡聚糖。然后可以通过碱处理释放大部分剩余的木葡聚糖。缺乏木葡聚糖外切糖苷酶的突变体的研究表明，这些酶与葡聚糖内切葡糖基酶/水解酶一起主要作用于酶易接近部分（Sampedro等人，2010;Günl和Pauly，2011;Günl ，2011; Sampedro等人，2012; Sampedro等人，2017）。消化拟南芥木葡聚糖与内切葡聚糖酶攻击未经取代的葡萄糖残基导致三个和四个葡萄糖亚基的混合物，可以通过MALDI-TOF质谱快速和容易地分析（Lerouxel等人， ...
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| Implantation of Human Peripheral Corneal Spheres into Cadaveric Human Corneal Tissue
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Stem and progenitor cells isolated from human limbal tissue can be cultured in vitro as spheres. These spheres have potential for use as transplantable elements for the repopulation of corneal tissue (Mathan et al., 2016). Herein we describe the detailed protocol for the implantation of human corneal spheres into cadaveric human corneal tissue. This protocol describes the procedure for sphere formation and culture, preparation of tissue for sphere implantation, corneal limbus microsurgery and sphere implantation.
[摘要] 可以将从人角膜缘组织分离的茎细胞和祖细胞作为球体体外培养。 这些球体有可能用作角膜组织再造的可移植元件（Mathan等人，2016）。 这里我们描述了将人角膜球植入尸体人角膜组织的详细方案。 该协议描述了球形成和培养的过程，球体植入组织的制备，角膜缘显微外科手术和球体植入。
【背景】以前的研究集中在隔离角膜缘细胞，这些细胞完全是上皮细胞（角膜缘干细胞）或基质（角质细胞祖细胞），以破译他们在角膜内稳态和伤口修复中的各自角色。 该方案旨在通过其在培养物中形成球体的功能能力来分离角膜缘细胞，并且其本质将包括上皮和间质的多种细胞，其有助于角膜缘的形成。 在分离这些球体之后，我们正在调查其在植入后角膜修复中的潜在用途。 在这里，我们描述了一种用于将这些球体植入人角膜组织和下游分析的体外手术方案。
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| Ex vivo Ooplasmic Extract from Developing Drosophila Oocytes for Quantitative TIRF Microscopy Analysis
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Understanding the dynamic behavior and the continuously changing composition of macromolecular complexes, subcellular structures and organelles is one of areas of active research in both cell and developmental biology, as these changes directly relate to function and subsequently to the development and homeostasis of the organism. Here, we demonstrate the use of the developing Drosophila oocyte to study dynamics of messenger ribonucleoprotein complexes (mRNPs) with high spatiotemporal resolution. The combination of Drosophila genetics with total internal reflection (TIRF) microscopy, image processing and data analysis gives insight into mRNP motility and composition dynamics with unprecedented precision.
[摘要] 了解大分子复合物，亚细胞结构和细胞器的动态行为和不断变化的组成是细胞和发育生物学中积极研究的领域之一，因为这些变化与功能和随后的生物体的发育和稳态直接相关。 在这里，我们演示了使用发展中的果蝇卵母细胞来研究具有高时空分辨率的信使核糖核蛋白复合物（mRNPs）的动力学。 果蝇的遗传学与全内反射（TIRF）显微镜，图像处理和数据分析结合，以前所未有的精确度了解了mRNP的运动性和组成动力学。
【背景】细胞内运输是活细胞的基本过程之一。几乎细胞内的所有细胞 - 离子，分子，复合物，细胞器 - 被积极地传输，使局部熵减少。尽管近年来，我们对这些运输过程的机理有了很大的了解，但我们的大部分知识来自于体外和细胞培养研究。在这些简化的系统中，很难确定是否利用运输监管流程的全部潜力。另一方面，组织，器官，组织和生物体通常太复杂，无法有效地研究时空分辨率，足以匹配这些运输过程的规模。为了结合自下而上和自上而下的方法的优点，已经开发了在保持复杂性的同时，使这些过程更易于访问的技术。一个例子是从ambiphian（例如，非洲爪蟾）卵母细胞和胚胎中制备大量细胞质提取物来研究细胞分裂（Lohka和Masui，1983; Murray，1991; Sawin和Mitchison，1991）。我们最近显示，在细胞质液滴 - ...
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