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Amersham Hybond P 0.45 PVDF blotting membrane

Amersham Hybond P 0.45 PVDF 300mm×4m 1卷/ PK

Company: GE Healthcare
Catalog#: 10600023
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In vitro Analysis of Ubiquitin-like Protein Modification in Archaea
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract]  The ubiquitin-like (Ubl) protein is widely distributed in Archaea and involved in many cellular pathways. A well-established method to reconstitute archaeal Ubl protein conjugation in vitro is important to better understand the process of archaeal Ubl protein modification. This protocol describes the in vitro reconstitution of Ubl protein modification and following analysis of this modification in Haloferax volcanii, a halophilic archaeon serving as the model organism. [摘要]  泛素样(Ubl)蛋白广泛分布于古细菌中并参与许多细胞途径。 为了更好地理解古细菌Ub1蛋白质修饰的过程,重建体外古细菌Ubl蛋白质缀合物的完善方法是很重要的。 该协议描述了Ubl蛋白质修饰的体外重建以及在作为模型生物的嗜盐古细菌Haloferax volcanii 中对这种修饰进行分析。

【背景】泛素(Ub)与靶蛋白共价连接的过程被称为泛素化,其控制真核细胞中大量的细胞过程(Glickman和Ciechanover,2002; Komander和Rape,2012)。遍在蛋白化由一系列酶(包括Ub激活酶(E1),Ub结合酶(E2s)和Ub连接酶(E3s))催化。泛素化的体外重建是确定酶之间或E3与蛋白质底物之间特异性的有用测定法(Zhao等人,2012)。在古细菌中,Ubl蛋白SAMP采用Ub折叠,并且与E1样酶UbaA催化的蛋白靶标异肽连接[Maupin-Furlow,(2014)综述]。尽管E1同系物在古细菌中广泛存在,但基于一级序列比较,在大多数古细菌中未预测经典E2或E3酶。我们最近对Haloferax volcanii的研究表明甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)是Ubl蛋白质修饰(sampylation)与UbaA一起在体内温和的氧化条件下和< (体外)(fu="">

Chase Assay of Protein Stability in Haloferax volcanii
Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract]  Highly regulated and targeted protein degradation plays a fundamental role in almost all cellular processes. Determination of the protein half-life by the chase assay serves as a powerful and popular strategy to compare the protein stability and study proteolysis pathways in cells. Here, we describe a chase assay in Haloferax volcanii, a halophilic archaeon as the model organism. [摘要]  高度调节和靶向的蛋白质降解在几乎所有的细胞过程中发挥重要作用。通过追踪测定法测定蛋白质半衰期是比较蛋白质稳定性和研究细胞中蛋白水解途径的有力和普遍的策略。在这里,我们描述了作为模型生物体的嗜盐古细菌Haloferax volcanii 中的追踪测定。

背景 在真核生物中,泛素蛋白酶体系统在高选择性和靶向性蛋白水解中起主要作用(Glickman and Ciechanover,2002)。最近的证据表明,小型古细菌泛素样修饰蛋白或SAMPs也起到了蛋白酶体破坏的靶向蛋白的作用(Maupin-Furlow,2014; Anjum等人,2015; Fu et al。 。,2016)。体内蛋白质半衰期的测量提供了研究蛋白水解途径的直接途径。环己酰胺追踪和脉冲追踪测定通常用于监测真核生物中靶向蛋白质的降解(Zhou,2004)。前一种方法用于确定放线菌酮抑制平移伸长后所有细胞蛋白的半衰期;而脉冲追踪测定法测量新合成(脉冲标记)蛋白质的周转率,而不干扰正常的细胞生长。与真核系统相比,确定古细菌中一种给定蛋白质半衰期的快速简便方法尚未明确。因此,我们开发了一种方案,用于测量盐爱好的考古Haloferax volcanii的体内蛋白质稳定性。使用翻译抑制剂(茴香霉素)和转录(放线菌素D)来最小化该古细菌中新蛋白质的合成。 ...

Infection of Nicotiana benthamiana Plants with Potato Virus X (PVX)
Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract]  Potato Virus X (PVX) is the type member of Potexvirus genus, a group of plant viruses with a positive-strand RNA genome (~6.4 kb). PVX is able to establish compatible infections in Nicotiana benthamiana, a commonly used host in plant virology, leading to mild symptoms, such as chlorotic mosaic and mottling. PVX has been widely used as a viral vector for more than two decades (Chapman et al., 1992; Baulcombe et al., 1995; Aguilar et al., 2015). It provides a feasible means for the systemic expression in plants of heterologous proteins, such as avirulence factors, proteins with pharmacological properties, etc., (Hammond-Kosack et al., 1995; Gleba et al., 2014), and also as a tool to help decipher the function ... [摘要]  马铃薯病毒X(PVX)是Potexvirus属(一组具有正链RNA基因组(〜6.4kb)的植物病毒)的类型成员。 PVX能够在烟草烟草(Nicotiana benthamiana)中建立相容的感染,这是常用于植物病毒学的宿主,导致轻度症状,如褪色马赛克和斑驳。 PVX已经被广泛用作病毒载体二十多年(Chapman等人,1992; Baulcombe等人,1995; Aguilar等人。它为异源蛋白质植物中的全身表达提供了可行的手段,例如无毒性因子,具有药理学性质的蛋白质,等等(Hammond-Kosack等人, 1995; Gleba等人,2014),并且还作为通过病毒诱导的基因沉默(VACS)(Lacomme和Chapman,2008)帮助解释植物中基因功能的工具。摩擦(A)和农用过滤(B)的两种不同的方案,即允许PVX在N中的有效乘法和传播。本文详细描述本文。摩擦方法需要先前感染的液体,并且通过诱导对叶组织的机械损伤来实现感染,从而允许病毒颗粒穿透植物表面。农杆菌过滤需要先前修饰的农杆菌携带并将PVX序列递送到植物细胞中。将土壤杆菌生长直至饱和,并用注射器将其浸入植物组织中建立感染。这两种方法中的任何一种都可以成功应用,选择应主要基于材料和时间的可用性,但建议在使用嵌合病毒时使用农杆菌滤过。

背景 ...

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