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Author:
Date:
2012-03-20
[Abstract] This protocol describes the basic principle of PCR/restriction digest genotyping of point mutations in worms, based on the principle of Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) analysis. This type of genotyping is, particularly, useful when phenotypic analysis of animals carrying point mutations is difficult (e.g., in a complex genetic background).
I will illustrate the general procedures, using an example of daf-2 gene, encoding the sole insulin/IGF-1 receptor of C. elegans. Gems et al.(1998) did a very elegant job and characterized a series of mutations of daf-2, including the following two temperature-sensitive hypomorphic alleles:
daf-2(e1370): Substitution C/T (wild type/mutant), amino acid change: Missense P to S
Flanking ...
[摘要] 该协议描述了基于限制性片段长度多态性（RFLP）分析的原理的蠕虫中点突变的PCR /限制性消化基因分型的基本原理。当具有点突变的动物的表型分析困难时（例如在复杂遗传背景中），这种类型的基因分型特别有用。
我将用一个编码C的唯一胰岛素/IGF-1受体的daf-2基因的实例来说明一般程序。 elegans 。 Gems等人（1998）做了非常优雅的工作，并且表征了daf-2的一系列突变，包括以下两个温度敏感的hypomorphic等位基因：
daf-2（e1370）：取代C/T（野生型/突变体），氨基酸改变：错配P至S
侧翼序列：
5'-CTCTATGAAATGGTTACACTCGGTGCTCAGCATATATTGGTTTGAGTAATGAGGTGT < br="">细胞内激酶结构域，I类，强表型。
daf-2（e1368）：替换C/T（野生型/突变体），氨基酸改变：错误S到L 侧翼序列： 5' -TCCGGAATTTACGTATTGAGGCAAAGTACTGTTCAGAAATVTATATGCTATCACAGT 细胞外配体结合域II类，弱表型。 在这里，我将向您展示如何设计用于PCR-RFLP分析的引物。 daf-2（e1370）：由Ken-on实验室Seung-Jae ...
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