| Live Imaging of Myogenesis in Indirect Flight Muscles in Drosophila
|
|
Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] The indirect flight muscles (IFMs) are the largest muscles in the fly, making up the bulk of the adult thorax. IFMs in Drosophila are generated during pupariation by fusion of hundreds of muscle precursor cells (myoblasts) with larval muscle templates (myotubes). Prominent features, including the large number of fusion events, the structural similarity to vertebrate muscles, and the amenability to the powerful genetic techniques of the Drosophila system make the IFMs an attractive system to study muscle cell fusion. Here we describe methods for live imaging of IFMs, both in intact pupae, and in isolated IFMs ex-vivo. The protocols elaborated upon here were used in the manuscript by (Segal et al., 2016).
[摘要] 间接飞行肌肉（IFM）是飞行中最大的肌肉，构成成年胸部的大部分。 通过将数百种肌肉前体细胞（成肌细胞）与幼虫肌肉模板（肌管）融合，在果蝇中产生IFMs 。 突出的特征，包括大量的融合事件，与脊椎动物肌肉的结构相似性，以及对果蝇系统强大的遗传技术的适应性使得IFM成为研究肌肉细胞融合的有吸引力的系统。 在这里，我们描述了在完整的蛹中和在离体的独立的IFM中实时成像IFM的方法。 （Segal等人，2016年）在手稿中使用了这里阐述的方案。
【背景】胚胎肌肉长期以来一直是肌肉发育研究的建立模型系统（Volk，1999; Chen和Olson，2004; Abmayr等人，2008; Richardson pup biological（Dutta，2006; Oas等人，2014; Weitkunat等人，2014; Shwartz等人，2016） ...
|
|
|
| Analysis of Enteric Neural Crest Cell Migration Using Heterotopic Grafts of Embryonic Guts
|
|
Author:
Date:
2016-09-05
[Abstract] Hirschsprung disease (HSCR), also named aganglionic megacolon, is a severe congenital malformation characterized by a lack of enteric nervous system (ENS) in the terminal regions of the bowel (Bergeron et al., 2013). As the ENS notably regulates motility in the whole gastrointestinal track, the segment without neurons remains tonically contracted, resulting in functional intestinal obstruction and accumulation of fecal material (megacolon). HSCR occurs when enteric neural progenitors of vagal neural crest origin fail to fully colonize the developing intestines. These “enteric” neural crest cells (ENCCs) have to migrate in a rostro-caudal direction during a fixed temporal window, which is between embryonic day (e) 9.5 and e14.5 in the mouse (Obermayr et al., 2013). ...
[摘要] Hirschsprung病（HSCR），也称为神经节巨结肠，是严重的先天性畸形，其特征在于在肠的末端区域缺乏肠神经系统（ENS）（Bergeron等人，2013）。由于ENS特别调节整个胃肠道的运动性，没有神经元的节段保持紧张收缩，导致功能性肠梗阻和粪便材料（巨结肠）的积累。 HSCR发生在迷走神经嵴来源的肠神经祖细胞不能完全殖民发育的肠道。这些"肠"神经嵴细胞（ENCC）必须在固定的时间窗口内沿着尾 - 尾方向迁移，其在小鼠的胚胎天（e）9.5和e14.5之间（Obermayr等， ，2013）。最近，我们的小组产生了称为荷斯坦的新的HSCR小鼠模型，其中ENCC的迁移受损，因为它们的微环境中胶原VI水平增加（Soret等人，2015）。在这里，我们描述了允许我们演示这种迁移缺陷的细胞自主性的方法。在从先前描述的异位移植方法改造的该系统中（Breau等人，2006），供体组织是e12.5中肠的完全定殖的区段，而宿主组织是e12的非耳部分.5后肠。在宿主组织中ENCC迁移的程度在培养24小时后评估，并且当供体组织具有转基因背景例如允许内源标记的Gata4-RFP（Pilon等人，2008）时极大地促进ENCC在宿主组织中的迁移的程度的ENCCs。根据供体和宿主组织的遗传背景，这种方法可以允许评估细胞自主和非细胞自主缺陷的ENCC迁移。
|
|
|
| Design of a Transcription-based Secretion Activity Reporter (TSAR) for the Type III Secretion Apparatus of Shigella flexneri and Uses Thereof
|
|
Author:
Date:
2014-10-20
[Abstract] Many gram-negative bacterial pathogens, including Shigella flexneri, are able to translocate bacterial proteins, dubbed effectors, across the host cell plasma membrane into the host cell cytosol using a syringe-like structure, the type three secretion apparatus (T3SA). While some bacteria use their T3SA to modulate their phagosomal environment (Salmonella spp.), establish pedestal structure to form microcolonies on the plasma membrane (Enteropathogenic Escherichi coli) or lyse their entry vacuole (Shigella spp.), they all have in common a tightly regulated activity of their T3SA. However, the tracking of the activity of the T3SA in infected cells and tissue has been difficult to perform. Using the property of MxiE-dependent promoters that are ...
[摘要] 包括灵芝氏菌在内的许多革兰氏阴性细菌病原体能够使用注射器样结构将类型三分泌物穿过宿主细胞质膜转运细菌蛋白质（配体效应子）到宿主细胞胞质溶胶中装置（T3SA）。虽然一些细菌使用它们的T3SA调节它们的吞噬体环境（沙门氏菌 spp 。），建立基质结构以在质膜上形成微集落（Enteropathogenic < em="">）或溶解它们的进入泡（志贺氏菌属。），它们都具有共同的严格调节的他们的T3SA的活性。然而，T3SA在感染的细胞和组织中的活性的跟踪一直难以进行。使用在T3SA是活性时上调的MxiE依赖性启动子的性质，我们最近设计了基于转录的分泌活性报道分子（TSAR），其允许以下的S的活性。使用快速成熟的GFP内在荧光，在组织培养细胞中实时地和体内实时分析灵敏度。在这里我们描述TSAR的设计及其应用于固定和活体样品的显微镜和流式细胞仪在结肠上皮细胞模型使用TC7组织培养细胞。
|
|
|