| Isolation and Purification of Schwann Cells from Spinal Nerves of Neonatal Rat
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] Primary cultured Schwann cells (SCs) are widely used in the investigation of the biology of SC and are important seed cells for neural tissue engineering. Here, we describe a novel protocol for harvesting primary cultured SCs from neonatal Sprague-Dawley (SD) rats. In the present protocol, dissociated SCs are isolated from the spinal nerves of neonatal rats and purified by the treatment of cytosine arabinoside (AraC).
[摘要] 原代培养的雪旺氏细胞（SCs）广泛用于SC的生物学研究，是神经组织工程的重要种子细胞。 在这里，我们描述了从新生Sprague-Dawley（SD）大鼠中收获原代培养的SC的新方案。 在本方案中，解离的SCs从新生大鼠的脊神经中分离并通过治疗阿糖胞苷（AraC）进行纯化。
【背景】SC是周围神经系统（PNS）的神经胶质细胞。主要SCs的分离和纯化是研究SC生物学的关键步骤。此外，纯化的原代培养的SC是用于神经组织工程的重要种子细胞。迄今为止，已经基于Brockes（Brockes等人，1979）的方法报道了培养SC的各种方法。通过报道的方法，坐骨神经主要用于SC隔离，因为它们尺寸大并且可以容易地获得。然而，坐骨神经的SC容易被成纤维细胞污染，因为结缔组织难以清除。特别是神经管和神经束是成纤维细胞的主要来源。没有特殊处理，污染的成纤维细胞比SCs快得多，并且将很快成为培养物中主要的细胞。在过去几十年中，已经开发出许多用于从污染成纤维细胞中分离SC的纯化方法。这些纯化方法的细节包括单一或组合的抗有丝分裂处理（Wood，1976），抗体介导的细胞溶解（Brockes等人，1979），免疫选择（Assouline等人，，1983; ...
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| Optogenetic Stimulation and Recording of Primary Cultured Neurons with Spatiotemporal Control
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] We studied a network of cortical neurons in culture and developed an innovative optical device to stimulate optogenetically a large neuronal population with both spatial and temporal precision. We first describe how to culture primary neurons expressing channelrhodopsin. We then detail the optogenetic setup based on the workings of a fast Digital Light Processing (DLP) projector. The setup is able to stimulate tens to hundreds neurons with independent trains of light pulses that evoked action potentials with high temporal resolution. During photostimulation, network activity was monitored using patch-clamp recordings of up to 4 neurons. The experiment is ideally suited to study recurrent network dynamics or biological processes such as plasticity or homeostasis in a network of neurons ...
[摘要] 我们研究了文化中的皮层神经元网络，并开发了一种创新的光学装置，以空间和时间精确度激发大量神经元。 我们首先描述如何培养表达channelorhodopsin的原代神经元。 然后，我们将根据快速数字光处理（DLP）投影机的工作原理来详细说明光遗传设置。 该设置能够用独立的光脉冲训练数十到数百个神经元，以高时间分辨率诱发动作电位。 在光刺激期间，使用多达4个神经元的膜片钳记录监测网络活动。 该实验非常适合研究复杂的网络动力学或生物过程，如神经元网络中的可塑性或体内平衡，当子群体由其特征（相关性，速率和大小）进行精细控制的不同刺激激活时。
【背景】光致遗传学提供以毫秒精度控制神经元活动的平均值。然而，神经元通常通过同时激活整个群体的光的闪光或通过在整个视野上的时间调制强度的光同时激活（Boyden等人，2005）。然而，存在几种空间调节光并已被用于使谷氨酸不起作用的方法（Nawrot等人，2009）或激活表达神经元的通道视紫质（ChR2）（Guo等人，2009）（用于审查刺激神经元的可用方法具有空间和时间分辨率参见Anselmi等人，2015）。
为了获得刺激的空间控制，第一种可能性是使用激光并将其光束快速移动到不同位置。例如，通过用声光偏转器偏转激光束已经实现了在不同树枝状位置处的谷蛋白解冻（Shoham等人，2005）。只有我们在有限的区域内足够缓慢地调节光强度，这个策略才可能是可行的。或者，可以使用相位或强度的光调制器来实现光的空间图案。基于相位调制的全息技术允许以三维空间精度获得图像，但是可以以仅100Hz的速率显示图案（Papagiakoumou等人，2010）。如果二维图案是足够的，则可以通过将投影仪或阵列的LED放置在样品的共轭平面中来简单地获得强度调制（Farah等人，2007; ...
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| Neurite Outgrowth Assay
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Author:
Date:
2016-01-05
[Abstract] Neurite outgrowth in culture provides an easy way to determine the effects of a particular substrate or exogenous factor on neuron behavior. Dissociated neurons can be plated on a variety of substrates and the length of the longest neurite outgrowth can be compared. Here, we describe how to isolate and dissociate dorsal root ganglion (DRG) neurons, culture them on coverslips, and measure longest neurite outgrowth.
[摘要] 文化中的神经细胞生长提供了一种简单的方法来确定特定底物或外源因子对神经元行为的影响。 分离的神经元可以铺在各种底物上，并且可以比较最长的神经突生长的长度。 在这里，我们描述如何分离和解离背根神经节（DRG）神经元，将其培养在盖玻片上，并测量最长的神经突生长。
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