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Refrigerated centrifuge

离心机

Company: Eppendorf
Catalog#: 5415 R
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Isolation of Chromatin-bound Proteins from Subcellular Fractions for Biochemical Analysis
Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract]  Shuttling of proteins between different cellular compartments controls their proteostasis and can contribute in some cases to regulate their activity. Biochemical analysis of chromatin-bound proteins, such as transcription factors, is often difficult because of their low yield and due to the interference from nucleic acids. This protocol describes a method to efficiently fractionate cells combined with a mechanical (i.e., sonication) or an enzymatic treatment (i.e., benzonase) that facilitates analysis of chromatin-bound protein extracts by Western blot analysis or by protein pull-down assays. This approach can be valuable to enrich a particular protein within a particular subcellular fraction either to study specific post-translational modification patterns or to ... [摘要]  在不同细胞区室之间穿梭蛋白质控制它们的蛋白质稳态,并且在某些情况下可以有助于调节它们的活性。 染色质结合蛋白(例如转录因子)的生化分析通常是困难的,因为它们的产率低并且由于核酸的干扰。 该协议描述了一种有效分离细胞的方法,结合机械(即,超声处理)或酶处理(即,benzonase),有助于分析染色质结合蛋白提取物 通过蛋白质印迹分析或蛋白质下拉分析。 该方法对于富集特定亚细胞级分内的特定蛋白质以研究特定的翻译后修饰模式或鉴定特定的蛋白质 - 蛋白质相互作用可能是有价值的。
【背景】许多染色质结合蛋白的活性和翻译后调节研究很少,因为在分离它们进行生化分析时存在技术困难。这甚至是转录因子的情况,例如基本的螺旋 - 环 - 螺旋(bHLH)转录因子,其通常在组织或细胞模型中具有稀缺的时间和空间表达模式(Dennis 等。,2018)。当生物材料的量成为研究分子途径的障碍时,协议细化有助于解除技术限制(Gillotin和Guillemot,2016)。在我们最近的研究中,我们努力了解神经元bHLH转录因子Ascl1的蛋白水解是如何在神经元分化的细胞模型中调节的(Gillotin et ...

Isolation of LYVE-1+ Endothelial Cells from Mouse Embryos
Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract]  Lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1, or LYVE-1, is a type 1 integral membrane glycoprotein expressed by lymphatic endothelial cells (LECs). LYVE-1 is commonly used as a biological marker to visually distinguish developing lymphatic vessels from blood endothelial cells (arteries or veins). As our understanding of lymphatic biology is still lacking today, the need to isolate LECs apart from other endothelial cells has taken on greater importance. The following procedure describes a magnetic bead separation procedure for isolating LEC-rich populations of cells from developing mouse embryos. [摘要]  淋巴管内皮透明质酸受体1或LYVE-1是由淋巴管内皮细胞(LEC)表达的1型整合膜糖蛋白。 LYVE-1通常用作生物标记物,以在视觉上区分发育中的淋巴管与血液内皮细胞(动脉或静脉)。 由于我们今天仍然缺乏对淋巴生物学的理解,因此将LEC与其他内皮细胞分离的必要性变得更加重要。 以下程序描述了用于从发育中的小鼠胚胎中分离富含LEC的细胞群的磁珠分离程序。

【背景】淋巴脉管系统形成二次循环系统,其起到从组织排出细胞外液的作用,允许脂质的转运,并提供免疫细胞运输和运输功能。虽然我们对淋巴系统的理解在过去的几十年中迅速扩大,但与我们对动脉和静脉生物学的了解相比,它仍然缺乏。 LECs鉴定LYVE-1受体表达提供了区分淋巴组织的有用工具,但已知LYVE-1在其他组织中表达,包括肝和脾窦状细胞和胰腺外分泌和朗格汉斯细胞胰岛(Banerji et al。,1999)。由LYVE1基因编码,LYVE-1受体的生物学功能尚未确定,但除了跨内皮细胞的HA转运外,还有人建议参与肿瘤转移(Jackson,2003)。尽管LYVE-1在多种组织中表达,但它仍然是目前用于区分LEC与其他内皮细胞的常用标记物。该方法的目的是使用与LYVE-1抗体偶联的dynabeads以正选择方法从发育中的小鼠胚胎中分离LEC。

BMV Propagation, Extraction and Purification Using Chromatographic Methods
Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract]  Brome mosaic virus (BMV) is a well-known plant virus representing single-stranded RNA (ssRNA) positive-sense viruses. It has been widely used as a model in multiple studies concerning plant virus biology, epidemiology and the application of viral capsids in nanotechnology. Herein, we describe a method for BMV purification based on ion-exchange and size-exclusion chromatography. The presented method is of similar efficiency to previously described protocols relying on differential centrifugation and can easily be scaled up. The resulting BMV capsids are stable and monodisperse and can be used for further applications. [摘要]  雀麦花叶病毒(BMV)是众所周知的植物病毒,代表单链RNA(ssRNA)正义病毒。 它已被广泛用作植物病毒生物学,流行病学和病毒衣壳在纳米技术中的应用的多项研究中的模型。 在本文中,我们描述了基于离子交换和尺寸排阻色谱的BMV纯化方法。 所提出的方法与先前描述的依赖于差速离心的方案具有相似的效率,并且可以容易地按比例放大。 得到的BMV衣壳是稳定的并且是单分散的,并且可以用于进一步的应用。

【背景】纳米技术要克服的关键挑战之一是制定有效的和组织特异性的药物递送方法。植物病毒和病毒样颗粒(VLP)具有生物相容性和可生物降解性,不含对人类或动物健康有害的病原体,是合成药物载体的安全替代品,通常会激活免疫系统的不良反应或积聚在免疫系统中。身体到毒性水平。最后,病毒衣壳的生产相对便宜且快速(Ren et al。,2007; Arcangeli et al。,2014)。

Bromoviridae 家族的雀麦花叶病毒(BMV)是用作纳米颗粒载体的良好候选物,因为它显示出所有上述特征并且是研究最多的植物病毒之一(Figlerowicz,2000; Alejska et al。,2005; Urbanowicz et al。,2005; Wierzchoslawski et al。,2006; Kao vet al。 ...

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