| Live Confocal Imaging of Brachypodium Spikelet Meristems
|
|
Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Live confocal imaging of fluorescent reporters and stains in plant meristems provides valuable measurements of gene expression, protein dynamics, cell polarity, cell division, and growth. The spikelet meristem in the grass Brachypodium distachyon (Brachypodium) is well suited to live imaging because of the ease of dissection, small meristem size, simple arrangement of organs, and because each plant provides abundant spikelet meristems. Brachypodium is also far easier to genetically transform than other grass species. Presented here is a protocol for the growth, staging, dissection, mounting, and imaging of Brachypodium spikelet meristems for live confocal imaging.
[摘要] 荧光报告子和植物分生组织中的染色的活共聚焦成像提供了基因表达，蛋白质动力学，细胞极性，细胞分裂和生长的有价值的测量。 由于易于解剖，小分生组织大小，器官的简单排列，并且因为每种植物提供了丰富的小穗分生组织，因此草 Brachypodium distachyon （Brachypodium）中的小穗分生组织非常适合于活体成像。 短柄草比其他草种更容易进行遗传转化。 这里介绍的是用于活体共聚焦成像的短柄草小穗分生组织的生长，分期，解剖，安装和成像的方案。
植物器官（叶子，树枝，花）起源于分生组织，分生组织是含有干细胞群的植物的生长尖端。转录报告子，荧光融合蛋白和荧光染料的活共聚焦成像提供了关于涉及分生组织维持和器官起始的无数基因产物的重要空间和时间信息。 拟南芥花序分生组织的实时成像是一个持续的探索线（Reddy et al。，2004; Bhatia et al。，2016; Prunet et al。，2016; Willis et al。，2016; Landrein et al。，2018; Shi et al。，2018），而拟南芥之外的植物中分生组织的实时成像受到限制（Deb et al。，2015）。
这里展示的是一种共聚物实时成像方案，用于草 Brachypodium distachyon ...
|
|
|
| Artificial Inoculation of Epichloë festucae into Lolium perenne, and Visualisation of Endophytic and Epiphyllous Fungal Growth
|
|
Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Natural hosts for the fungal endophyte Epichloë festucae include Festuca rubra (fine fescue) and Festuca trachyphylla (hard fescue). Some strains also form stable associations with Lolium perenne (perennial ryegrass). L. perenne is a suitable host to study fungal endophyte–grass interactions, such as endophytic fungal growth within the plant and epiphyllous growth on the plant surface. Here we provide a detailed protocol based on work by, for artificial inoculation of E. festucae into L. perenne, and newly developed staining and visualization techniques for observing endophytic and epiphyllous hyphae and the expressorium, an appressorium-like structure used by the fungus to exit the plant. The staining method uses a combination of ...
[摘要] 真菌内生菌Epichloëfestucae的天然宿主包括 Festuca rubra （细羊茅）和 Festuca trachyphylla （硬羊茅）。一些菌株也与黑麦草（多年生黑麦草）形成稳定的关联。 升。 perenne 是研究真菌内生菌 - 草相互作用的合适宿主，例如植物内生真菌生长和植物表面的叶生生长。在这里，我们提供了一个基于工作的详细协议，用于 E的人工接种。 festucae 进入 L. perenne ，以及新开发的染色和可视化技术，用于观察内生和附生的菌丝和表达菌，这是一种类似真菌的结构，用于离开植物。染色方法使用葡聚糖结合苯胺蓝二铵盐（AB）和几丁质结合小麦胚凝集素缀合的Alexa Fluor ® 488-（WGA-AF488）的组合。该协议将是研究Epichloë -grass相互作用的有用工具，特别是不同Epichloë - 草关联，各种内生菌 - 宿主发育阶段的比较，以及分析突变Epichloë菌株。
【背景】Latch和Christensen（1985）开发了一种用Epichloë内生菌人工感染草的方案。这项工作一直是广泛的 E的基础。 festucae Fl1- L. perenne 共生研究（Scott et al。，2012年综述）。在我们最近的工作中，我们描述了一种新发现的真菌结构，即能够实现 E的表达式。 ...
|
|
|
| Quantification of Starch in Guard Cells of Arabidopsis thaliana
|
|
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] In this protocol, we describe how to quantify starch in guard cells of Arabidopsis thaliana using the fluorophore propidium iodide and confocal laser scanning microscopy. This simple method enables monitoring, with unprecedented resolution, the dynamics of starch in guard cells.
[摘要] 在该方案中，我们描述了如何使用荧光团碘化丙啶和共聚焦激光扫描显微镜来量化拟南芥保卫细胞中的淀粉。 这种简单的方法能够以前所未有的分辨率监测保卫细胞中淀粉的动态变化。
【背景】淀粉是葡萄糖的复合聚合物，代表植物储存碳水化合物的最丰富形式。淀粉根据其衍生的细胞类型和外部环境条件提供不同的功能。在控制水和二氧化碳与环境交换的气孔中边界的保卫细胞中，淀粉可在转变为光的几分钟内动员，有助于产生有机酸和糖，从而增加保卫细胞膨胀并促进气孔开放。在叶肉细胞中，淀粉通常在白天逐渐积累，并在夜间降解以支持代谢（Santelia和Lunn，2017）。
因为保卫细胞仅占总叶的一小部分，所以难以使用常规方法定量测量淀粉。到目前为止，保卫细胞中的淀粉积累主要通过碘染色显现。该技术可以确定淀粉的存在/不存在，但不能提供准确的定量信息。
在这里，我们描述了一种基于荧光的成像方法来量化拟南芥保护细胞中的淀粉。该技术基于细胞壁材料和其他葡聚糖底物（包括淀粉）与荧光假席夫试剂碘化丙啶（PS-PI）的共价标记。用高碘酸处理分离的表皮，以将葡萄糖单元的羟基氧化成醛和酮基团。然后醛基（-CHO）可以与碘化丙锭共价反应，产生具有高荧光葡聚糖的样品，非常适合于共聚焦激光扫描显微镜。保卫细胞叶绿体中单个淀粉颗粒的面积可以使用数字成像来确定。我们应用这种方法来评估完整的拟南芥叶片的保护细胞中的淀粉含量在昼夜循环中的动态变化，并确定fusicoccin（质子泵的化学活化剂）对淀粉量的影响。分离表皮的保卫细胞剥离漂浮在气孔开放缓冲液中的碎片（Horrer ...
|
|
|