| Determination of Antibacterial Activity of Film Coatings against Four Clinically Relevant Bacterial Strains
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Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] Antibacterial coatings have currently gained great importance in biomedical technology investigations. Because of the spatial arrangement of the film coatings, evaluation of antibacterial activity presents a new challenge regarding traditional bacterial counting methods. In this protocol, four clinically relevant pathogens, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus were incubated on titania mesostructured thin film coatings for 24 h. Then, cell viability was studied considering three methods: counting of the number of colony forming units (CFU), live/dead staining, and quantification of extracellular DNA in suspension. Firstly, bacterial count was determined by the standard plate-count technique. Secondly, bacteria membrane integrity was ...
[摘要] [摘要]抗菌涂料目前在生物医学技术研究中具有重要意义。由于薄膜包衣的空间排列，抗菌活性的评估对传统的细菌计数方法提出了新的挑战。在此协议中，将四种临床相关病原体，鼠伤寒沙门氏菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌在二氧化钛介孔薄膜涂层上孵育24小时。然后，考虑三种方法研究细胞生存力：计数菌落形成单位（CFU）的数量，活/死染色以及悬浮液中细胞外DNA的定量。首先，通过标准的盘数技术确定细菌数。其次，通过利用两种荧光染料评估细菌膜的完整性，这两种荧光染料可以区分活细菌（完整的膜）和死细菌（破膜的）。最后，通过分光光度法定量细胞外DNA 。以这种方式，上述三种技术使得能够通过定性和定量分析研究细菌的生存力。
[背景]功能性涂料，由于他们提供的材料工程领域的宝贵优势被广泛研究。它们能够引入新的表面特性，而不会改变材料的体积特性。在它们的功能中，抗菌涂层对于生物医学应用已显示出极大的重要性（Mateescu等人，2015）。从这个意义上讲，纳米技术提供了制造抗菌涂层的重要工具。我们的小组已经实现了具有广谱杀菌活性的纳米结构涂层的合成，而没有利用抗生素或排斥细菌的物质（Scilletta et al。，2019）。在这里，只有个êSUP ...
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| Detection of Catalase Activity by Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE) in Cell Extracts from Pseudomonas aeruginosa
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Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract] Bacteria in nature and as pathogens commonly face oxidative stress which causes damage to proteins, lipids and DNA. This damage is produced by the action of reactive oxygen species (ROS) such as hydrogen peroxide (H2O2), singlet oxygen, superoxide anion and hydroxyl radical. ROS are generated by antimicrobials, environmental factors (e.g., ultraviolet radiation, osmotic stress), aerobic respiration, and host phagocytes during infective processes. Pseudomonas aeruginosa, a versatile bacterium, is a prevalent opportunistic human pathogen which possesses several defense strategies against ROS. Among them, two catalases (KatA and KatB) have been well characterized by their role on the defense against multiple types of stress. In this protocol, KatA and ...
[摘要] 自然界中的细菌和病原体通常会面临氧化应激，导致蛋白质，脂质和DNA的损伤。 这种损害是由活性氧（ROS）如过氧化氢（H 2 O 2 2），单线态氧，超氧阴离子和羟基自由基的作用产生的。 ROS在感染过程中由抗菌剂，环境因素（例如，紫外线辐射，渗透压力），有氧呼吸和宿主吞噬细胞产生。 铜绿假单胞菌是一种多功能细菌，是一种普遍的机会性人类病原体，其具有针对ROS的几种防御策略。 其中，两种过氧化氢酶（KatA和KatB）在防御多种类型的压力方面的作用得到了很好的表征。 在该协议中，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检测KatA和KatB活性。 还有人认为KatB的检测是难以捉摸的。
【背景】 P上。铜绿假单胞菌是一种无处不在的细菌，它可以以游离形式在陆地和水生栖息地中发现，或作为机会性人类病原体在免疫功能低下的个体，皮肤损伤或囊性纤维化患者中引起致命性感染。为了抵御其有氧代谢产生的ROS，寄主吞噬泡和环境因素，这种微生物具有多种抗氧化策略。其中，两个单功能的过氧化氢酶（KatA和KatB）负责将H 2 O分解成水和O 2。 KatA是主要的过氧化氢酶并具有独特的特征：它对H 2 O 2抗性，渗透保护和毒力非常稳定并且是必不可少的（Hassett等人 2000; Lee等人，2005）。有人认为，KatA的稳定性是正常生长条件下高水平活性的主要因素之一，因此， ...
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| Superoxide Dismutase (SOD) and Catalase (CAT) Activity Assay Protocols for Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Assays for superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) activities are widely employed to indicate antioxidant responses underlying the toxic effects of test chemicals. Yet, earlier studies mainly described the procedures as performed according to manufacturer’s instructions without modifications that are specific to any organisms. The present protocol describes the steps in analyzing the superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) activities in C. elegans, which is a model organism that can be used to study effects of pharmaceutical compounds and environmental pollutants. The main steps include: (1) sample preparation; (2) total protein assay; (3) SOD activity assay; (4) CAT activity assay; and (5) medium list and formula, and also data analysis and performance notes.
[摘要] 超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性的测定被广泛用于表明测试化学品的毒性作用的抗氧化反应。 然而，早期的研究主要描述了根据制造商的说明进行的程序，而无需对任何生物体特异的修改。 本方案描述了分析线虫中超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性的步骤，它是可用于研究药物化合物和环境污染物的影响的模型生物。 主要步骤包括：（1）样品制备; （2）总蛋白测定; （3）SOD活性测定; （4）CAT活性测定; 和（5）中等名单和公式，以及数据分析和绩效说明。
【背景】生物标志物是对化学，药剂或治疗干预的响应而检查生物和病原过程至关重要的。生物体内的各种生物过程导致引起氧化应激的活性氧（ROS）。为了应对这种氧化应激，生物体可以部署超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）以清除ROS，以保护细胞的稳态（Balaban等，2005）。一方面，各种化学物质（污染物）可以阻止这种抗氧化反应，并扰乱包括人类在内的生物体的健康。另一方面，许多药物旨在加强抗氧化反应以改善健康。因此，SOD和CAT的活动对于反映化学品或/和药物的潜在影响非常重要。
秀丽隐杆线虫（秀丽隐杆线虫）是一种用于研究药物化合物（Dengg和van Meel，2004; Carretero等，2017）和环境污染物（Yu et ...
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